产毒素多杀性巴氏杆菌（T?Pm,Toxigenic Pasteurella multocida）是引起猪进行性萎缩性鼻炎（PAR,Progressive atrophic rhinitis）重要致病因子，PAR作为一种进行性的呼吸道疾病，在临床上会引起育肥猪生长缓慢，降低饲料报酬，使养猪业蒙受巨大的经济损失。临床症状主要表现为：鼻甲骨萎缩、颜面变形、持续性打喷嚏。多杀性巴氏杆菌毒素（PMT,Pasteurellamultocida toxin）是由片段为3858bp的ToxA基因编码大小为146kDa的坏死性毒素蛋白，它是PAR主要的保护性抗原之一。因此本课题通过分子生物学的方法对PMT进行分段研究得到分段重组蛋白，并对其生物学生性及免疫学特性进行初步研究，为AR的诊断及防制的进一步研究提供技术支持。　　 本课题参照GenBank上毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因序列AF240778，先设计1对引物，从本实验室分离鉴定的猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌中扩增出toxA编码区3858bp的片段，再根据toxA基因序列设计3对分段引物，即通过PCR方法将产毒素多杀性巴氏杆菌的毒素基因进行分段PCR扩增，得到3个基因片段分别为1084bp（ZQ）、1092bp（ZH）、906bp（HM），将3个基因片段转化到克隆载体PMD-18T上进行克隆，挑斑后进行酶切鉴定为阳性质粒后进行测序，测序结果正确，证明克隆载体构建成功，得到3个正确的克隆质粒PMD-ZQ、PMD-ZH、PMD-HM。再利用转化方法将克隆质粒转化到表达载体pET32a上，酶切鉴定为阳性质粒后进行测序，测序结果正确，证明表达载体构建成功，得到3个正确的表达载体质粒PET-ZQ、PET-ZH、PET-HM。　　 表达载体构建成功后转入大肠杆菌BL21（DE3）PlysS中通过IPTG诱导后进行SDS-PAGE验证，得知毒素基因里只有片段ZQ、HM得到表达，大小分别为75 kDa（ZQ）、50kDa（HM），ZH不表达。通过Westem blot方法检测ZQ、HM两个重组蛋白，只有HM重组蛋白得到了正确表达，且有很好的反应原性。后期通过Dot-ELISA、小鼠接毒实验等特异性实验，对该重组蛋白的生物学特性及免疫学特性进行了初步研究。结果表明，表达重组蛋白HM具有一定的生物学活性及反应原性和免疫原性；与天然蛋白比较，重组蛋白具有较高的特异性。该研究为多杀性巴氏杆菌毒素的生物学特性、蛋白功能性结构域及抗原表位的进一步研究奠定了基础，进而为猪传染性萎缩性鼻炎的诊断、检测和防疫工作提供了理论指导和技术支持，对猪传染性萎缩性鼻炎的预防、控制具有重要意义。