【摘 要】
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乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE）是由乙型脑炎病毒（Japanese Encephalitis virus,JEV）感染引起的人兽共患的一种重要虫媒病毒性传染病。本病对人类危害非常严重,是人类中枢神经系统（CNS）最常见的虫媒性疾病之一。对家畜主要引起种猪繁殖障碍和仔猪脑炎,给养猪业造成了巨大的威胁。猪是JEV的扩增宿主和储存宿主,在乙型脑炎从猪到蚊再到人的链锁传播中扮演
【基金项目】
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国家自然基金（31472227＆H81261160325）；
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乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE）是由乙型脑炎病毒（Japanese Encephalitis virus,JEV）感染引起的人兽共患的一种重要虫媒病毒性传染病。本病对人类危害非常严重,是人类中枢神经系统（CNS）最常见的虫媒性疾病之一。对家畜主要引起种猪繁殖障碍和仔猪脑炎,给养猪业造成了巨大的威胁。猪是JEV的扩增宿主和储存宿主,在乙型脑炎从猪到蚊再到人的链锁传播中扮演着极其重要的角色。目前针对JEV感染尚无有效的药物治疗,只能依靠疫苗预防,因此,加强JEV的抗病毒研究,寻求有效的药物治疗方法是当务之急。TRIM（Tripartite motif-containing）家族蛋白中许多成员具有调节天然免疫信号通路和抗病毒的功能,是抗病毒天然免疫反应的重要调节因子。研究报道TRIM22能够抑制HIV和流感病毒等多种病毒的增殖,鉴如此,本研究开展TRIM22对JEV增殖的影响以及初步研究其对病毒复制影响的机制,为乙脑的预防和新型药物的设计提供新的思路。主要研究内容有以下几个方面:1.TRIM22对JEV增殖的影响将人源TRIM22基因克隆入慢病毒载体p TRIP-CMV-3Flag-IRES-RFP获得重组质粒p TRIP-CMV-TRIM22-3Flag-IRES-RFP,进而转染HEK293T细胞,24h后以1.0 MOI的剂量接种JEV SX09S-01毒株,病毒感染24h后收取上清和细胞。通过空斑试验、定量Western blot和实时荧光定量PCR试验检测过表达TRIM22对JEV增殖的影响。空斑试验统计结果显示,瞬时转染p TRIP-CMV-TRIM22-3Flag-IRES-RFP组细胞中,JEV感染后形成空斑的数量明显减少,相对对照组减少了30%-40%（P＜0.001）。定量Western blot检测JEV感染后NS3蛋白的表达量,结果显示阴性对照组的NS3蛋白表达量明显高于过表达TRIM22的试验组。实时荧光定量PCR检测病毒粒子拷贝数的结果也表明过表达TRIM22组细胞中JEV的含量显著低于阴性对照（P＜0.001）。三个试验结果均表明在细胞水平上过表达TRIM22,可以显著抑制JEV的增殖。2.TRIM22抑制JEV增殖机制的初步探讨为了探讨TRIM22是不是通过泛素化途径降解JEV复制过程中的某个蛋白而抑制病毒的增殖,将pc DNA3.0-TRIM22-HA分别与含有JEV的C、E、NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5基因的真核质粒共转染HEK293T细胞,免疫共沉淀试验结果表明TRIM22与JEV的NS1蛋白存在相互作用,间接免疫荧光结果也表明TRIM22蛋白与JEV的NS1蛋白共定位于细胞质中。我们同时发现,pc DNA3.0-TRIM22-HA和PCR3.1-NS1-Flag共转染细胞结果显示,随着TRIM22蛋白表达量的增加,NS1的表达量也呈上升趋势。那么TRIM22与NS1间的相互作用在其抗JEV增殖中的具体作用有待深入研究。
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