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背景：
随着新治疗技术如骨髓移植、器官移植和强化治疗的开展及广谱抗生素和免疫抑制药物的广泛应用,临床上发生念珠菌感染的现象越来越普遍,而抗真菌药物由于其毒副作用和易产生耐药的局限性,使得白念珠菌在免疫低下患者中的发病率依然居高不下.由此,为了探索免疫低下患者中预防白念珠菌感染的措施,有必要建立适当的免疫抑制后系统感染念珠菌的动物模型,来模拟免疫功能低下患者的情况.我们同时也研究了重组念珠菌天冬氨酰蛋白酶(scrcted aspartylproteinase,Sap)预防接种对免疫功能低下时系统感染念珠菌的保护作用.
第一部分
目的：
建立免疫抑制小鼠系统感染白念珠菌模型,并观察其主要影响因素.
方法：
1)以环磷酰胺(CTX)100mg/kg和200mg/kg两个剂量水平分别对6周龄BALB/c小鼠进行单次腹腔注射(各3组),48h后各对应组分别经尾静脉注射1x105、106,107/ml的白念珠菌,通过各组的死亡率来确定半数致死量.2)以50、100mg/kgCTX单次腹腔注射,观察外周血中白细胞、淋巴细胞计数被抑制的程度.3)分别采用4和8周龄小鼠来观察周龄对死亡率的影响.4)通过组织病理检查和肾组织真菌培养来验证模型.
结果：
1)100mg/kgCTX+1×105/ml白念珠菌作用后,小鼠的死亡率接近50％.2)100mg/kgCTX单次腹腔注射后,外周血中白细胞、淋巴细胞计数下降超过30％.3)4周龄小鼠对模型建立条件的耐受性较差,死亡率高。4)组织病理检查和肾组织真菌培养结果表明模型小鼠肾脏中有菌丝生长或局灶性脓肿形成.
结论：
1)成功建立了免疫抑制后系统感染白念珠菌的小鼠模型.2)模型建立条件下,白念珠菌对小鼠肾组织有高亲嗜性.
第二部分
目的：
观察重组Sap2蛋白免疫接种3次(间隔1周)对模型小鼠抗白念珠菌系统感染的保护作用.
方法：
6周龄BALB/C小鼠随机分成3组:1)间隔1周,重组Sap2+弗氏完全佐剂(CFA)胫前肌注射3次,第3次免疫后1周时,按体重单次腹腔注射100mg/kgCTX,48h后经尾静脉注射1×105/ml的白念珠菌,剂量为0.01ml/g.2)间隔1周,CFA胫前肌注射3次,其余干预同第1组.3)间隔1周,PBS胫前肌注射3次,其余干预同第1组.分剐以这3种分组方式饲养小鼠,并在不同时间点检测下列指标,探讨模型小鼠的免疫功能动态变化:1)白念珠菌感染后21天内各组小鼠的死亡率.2)间接ELISA法测定各组小鼠血清特异性IgG抗体水平.3)ELISA法测定小鼠血清中IL-2、IL-4、IFN-γ、TNF-α的含量.4)流式细胞仪分析小鼠脾淋巴细胞中的CD4+/CD8+T细胞比例.5)测定各组小鼠肾脏中的荷菌量。6)比较各组小鼠脾脏重量.7)对各组小鼠的肾、肝、肺组织进行组织病理检查.
结果：
1)免疫组小鼠的死亡率显著低于对照组.2)免疫组小鼠血清中的特异性IgG抗体水平的显著高于对照组.3)念珠菌攻击后的第1、4、7天期间,IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α在第4天时的测量值高于第1和第7天水平.其中TNF-α的测量值始终低于正常对照水平.4)念珠菌攻击后的第1、4、7天期间,各组小鼠的CD4+/CD8+比值呈现相似的变化,其中第4天时的测量值低于第1和第7天水平.5)免疫组小鼠的肾脏荷菌量显著低于对照组.6)免疫组小鼠的脾脏重量显著高于对照组。7)免疫组小鼠肾组织中检出菌丝和局灶性脓肿的发生率低于对照组.
结论:
1)重组Sap2蛋白间隔1周免疫接种3次对模型小鼠抗白念珠菌系统感染具有一定的保护作用.
2)重组Sap2蛋白间隔1周免疫接种3次后会导致小鼠出现脾大.