从郑州某养猪场一患病小猪的脑和脾、肾等内脏内，我们分离到一株病毒。接种到BHK细胞株后，该病毒能产生典型的细胞病变（CPE），感染的细胞融合，形成合胞体。采用固定病毒、稀释血清的方法进行中和实验，证明该病毒株能被猪伪狂犬病毒（PRV）的阳性血清所中和，其中和效价为1：107，对照伪狂犬病毒株鄂A株中和效价为1：209。用Reed-Muench法测该病毒的TCID₅₀滴度为10^-6.64/0.1ml。用该病毒肌肉注射成年健康家兔，能引起家兔嘶咬注射部位，四肢麻痹等典型的伪狂犬病症状。以上试验证明该病毒确为伪狂犬病毒。 根据GeneBank公布的伪狂犬病毒的TK基因序列，我们设计了一对引物，然后利用聚合酶链式反应（PCR）技术扩增其TK基因，TK基因克隆到pGEM-T-Easy载体后，利用PCR技术，酶切反应技术进行鉴定后，再送到大连宝生物公司进行测序。测序结果显示，我们得到了TK基因的完整序列，该基因长945bp,编码315个氨基酸。 利用DNA Star软件将分离毒株的TK基因序列与LA株,KOR株的TK基因序列进行比较发现，同源性均为97.3％。这说明TK基因是较保守的。我们同时发现在分离株的ATG下游第706，第924个核苷酸处有单个碱基的缺失，在第848个碱基处有13个碱基的缺失，造成第236个氨基酸后的氨基酸序列变化，与对应两序列同源性下降，均为75.9％。氨基酸序列发生变化，但该毒株的毒力并没下降，此结果说明，无论是开发PRV的TK基因缺失苗，还是开发以TK基因缺失为基础，以PRV为载体的基因工程多价苗，缺失第706个核苷酸以后的序列，可能得不到理想结果。 在试验中，我们提出了PRV基因组提取的新方法，为猪伪狂犬病的快速诊断提供了一些帮助，该方法同时可用于其它病毒基因组的提取；我们 刘红亮 厂n大业人学儿门体叶毕业论文 得到了完整的TK基因，为研制猪伪狂大病的TK基因缺失基因工程苗做 好了基础工作，同时也可由此出发，开展以PRV为载体的基因工程多价苗 的研究IK基因序列分析的结果，对于进一步研究胸昔激酶上氨基酸的功 能位点有一定帮助，对于确定构建TK缺失载体时应缺失的位置有点意义。