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研究目的:观察三参饮（SSY）及鲁斯可皂苷元（Ruscogenin）对P2X7/NLRP3信号通路的影响,对原发性干燥综合征（pSS）的作用机制进行初步探讨。研究方法:1.三参饮对pSS患者临床症状及P2X7/NLRP3信号通路的影响收集80例pSS患者,分为治疗组、对照组各40例。治疗组和对照组的所有患者均接受羟氯喹治疗,治疗组每日口服三参饮。比较治疗前后的临床疗效（ESSPRI、ESSDAI评分）、唾液腺（15min唾液流量）与泪腺功能（Schirmer试验）。同时收集外周血样获得血清,采用酶联免疫吸附测定法检测细胞因子与P2X7/NLRP3信号通路蛋白水平。2.三参饮对SS小鼠颌下腺组织及血清P2X7/NLRP3信号通路的影响采用弗氏不完全佐剂联合百白破建立小鼠干燥综合征模型,随机分为空白对照组、模型组、模型组+羟氯喹、模型组+三参饮（1g/kg）组、模型组+三参饮（2g/kg）组。检测各组小鼠体重、唾液分泌、唾液腺指数、颌下腺活性氧（ROS）、颌下腺与血清细胞因子、颌下腺病理学改变、颌下腺P2X7/NLRP3信号通路。3.Ruscogenin对SS小鼠颌下腺组织及腺体细胞P2X7/NLRP3信号通路的影响分别用Ruscogenin和等体积的无菌PBS给予NOD/ShiLtJ小鼠,取下颌下腺的腺体细胞用TNF-α、Ruscogenin处理。在第11、13、15、17和20周测量唾液分泌率（SFR）。采用苏木精-伊红染色法对颌下腺进行组织学分析。应用qRT-PCR技术对IL-6、IL-17、TNF-α、IL-1-β检测mRNA表达。Western blot法测定了AQP5、AQP4、P2X7R、NLRP3、caspase-1、IL-1β、Bax、Bcl-2、Bax、Bcl-2表达量。应用AO/PI染色及流式细胞仪测定细胞的凋亡。研究结果:1.三参饮对pSS患者临床疗效、唾液腺及泪腺功能、外周血清中细胞因子与P2X7/NLRP3信号通路蛋白的影响1.1三参饮对pSS患者疾病活动的影响:治疗前两组患者ESSPRI无明显差异,治疗后SSY组的ESSPRI评分（主要终点）范围达到患者可接受的症状状态（PASS）为52.5%,较对照组（32.5%）显著升高（P＜0.05）。1.2三参饮对pSS患者唾液腺和泪腺功能的影响:两组在治疗前的差异并不明显,治疗后两组的疗效优于治疗前,但与对照组相比,SSY组15min内唾液流率显著升高,有统计学差异（P＜0.05）。对于泪液功能评价,SSY组5min内泪液分泌较对照组亦有明显升高（P＜0.05）。1.3三参饮对pSS患者细胞因子的作用:两组在治疗之前没有显著的差别。两组患者血清IL-1β、TNF-α IL-6水平明显低于对照组。SSY组与对照组比较,可显著降低pSS患者血清细胞因子TNF-α和IL-1β水平（P＜0.05）,但是IL-6水平无显著性差异（P＞0.05）。1.4三参饮对pSS患者P2X7/NLRP3水平的影响:治疗前,两组无显著性差异。治疗后,两组均能抑制P2X7/NLRP3表达,与对照组相比,SSY组能显著降低pSS患者血清P2X7、NLRP3、ASC、Caspase-1水平,两组间有显著性差异（P＜0.05）。2.三参饮对SS模型小鼠体重、唾液分泌、唾液指数、血清及颌下腺细胞因子水平、颌下腺病理改变、颌下腺P2X7/NLRP3信号通路蛋白表达的影响2.1三参饮对SS模型小鼠体重的影响:正常组体重稳定增加,模型组小鼠体重下降,与模型组比较,三参饮可显著增加SS小鼠体重（P＜0.01）。2.2三参饮对SS模型小鼠唾液分泌的影响:与正常组相比,SS小鼠唾液分泌显著降低。与模型组相比,三参饮可显著增加SS小鼠的唾液分泌（P＜0.01）。2.3三参饮对SS模型小鼠唾液指数的影响:与正常组相比,SS小鼠的唾液腺指数显著降低。与模型组相比,三参饮可显著增加SS小鼠的唾液腺指数（P＜0.01）。2.4三参饮对SS模型小鼠颌下腺组织活性氧（ROS）的影响:与正常对照组相比,SS小鼠颌下腺ROS水平显著增加,与模型组相比,三参饮和羟氯喹组均能不同程度的减少ROS水平（P＜0.01）。2.5三参饮对SS模型小鼠细胞因子的影响:与正常对照组相比,SS小鼠颌下腺与血清细胞因子（IL-6,IL-1β and TNF-α）水平显著增加,与模型组相比,三参饮和羟氯喹组均能不同程度的降低IL-6,IL-1β and TNF-α水平（P＜0.01）。2.6三参饮对SS模型小鼠颌下腺病理学改变的影响:与正常对照组相比,模型组小鼠颌下腺淋巴细胞浸润增加,细胞坏死脱落,病变明显。三参饮和羟氯喹组可以使这些变化显著恢复。2.7三参饮对SS模型小鼠颌下腺透射电镜的影响:与正常对照组相比,模型组小鼠颌下腺电镜显示,颌下腺线粒体萎缩、融合等,然而,三参饮和羟氯喹组可以使这些变化显著恢复。2.8三参饮对SS模型小鼠颌下腺P2X7/NLRP3信号通路的影响:模型组小鼠颌下腺组织中P2X7、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白的表达较正常对照组显著升高;然而,与模型组比较,三参饮和羟氯喹可以显著降低P2X7、NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β蛋白表达（P＜0.01）。3.Ruscogenin对SS模型小鼠唾液分泌、颌下腺炎症、颌下腺组织腺体细胞、AQPs、炎症相关因子的影响3.1 Ruscogenin对SS模型小鼠唾液分泌、颌下腺炎症的影响:NOD/ShiLtJ组和Vehicle组的SFR逐渐降低,而与用Vehicle处理的小鼠相比,使用Ruscogenin处理的小鼠的SFR没有下降（P＜0.05）。通过对下颌下腺的组织学分析,发现NOD/ShiLtJ组和Vehicle组都表现出大量的淋巴细胞浸润,0.3mg/kg的Ruscogenin处理可以减少淋巴细胞的浸润,减少炎症中心的面积和数量,1mg/kg的Ruscogenin可以进一步加强这种减少作用。与Vehicle组相比,Ruscogenin 0.3组和Ruscogenin 1 组IL-6,IL-17,TNF-α和IL-1β mRNA表达明显降低,且 1 mg/kg Ruscogenin的效果优于0.3 mg/kg Ruscogenin（P＜0.01）。3.2 Ruscogenin对SS模型小鼠颌下腺组织腺体细胞、AQPs和炎症相关因子的影响:通过Western blot分析,NOD/ShiLtJ组和 Vehicle组的 AQP5、AQP4、P2X7R、NLRP3、caspase 1和IL-1β蛋白水平没有差异。但是与Vehicle处理的小鼠相比,Ruscogenin处理的小鼠增加了AQP5和AQP4蛋白表达,下降了P2X7R、NLRP3、caspase 1和IL-1β表达水平,其中Ruscogenin 1组表现出更好的效果（P＜0.05）。3.3 Ruscogenin对SS模型小鼠腺体细胞凋亡的影响:与正常小鼠（BALB/c）相比,NOD/ShiLtJ小鼠腺体细胞的凋亡明显升高,而1mg/kg Ruscogenin的处理显著抑制了NOD/ShiLtJ小鼠腺体细胞的凋亡。暴露于TNF-α前,使用不同剂量的Ruscogenin培养腺体细胞。流式细胞仪检测结果显示,TNF-α对细胞的凋亡有显著影响（P＜0.01）,而Ruscogenin对TNF-α的诱导作用有显著的抑制作用（P＜0.01）。再者,与对照组相比,TNF-α组细胞表现出较低的AQP5和AQP4蛋白水平,以及较高的NLRP3、caspase-1和IL-1β表达水平（P＜0.001）。随着Ruscogenin剂量的升高,与单独用TNF-α处理的细胞相比,TNF-α与Ruscogenin共同处理的细胞AQP5和AQP4水平逐渐升高,NLRP3、caspase-1 和IL-1β表达逐步减少（P＜0.05）。结论:1.三参饮对pSS患者临床症状及P2X7/NLRP3信号通路的影响与对照组比较,三参饮能显著提高临床疗效、改善唾液腺与泪腺功能,降低干燥综合征患者血清细胞因子水平、P2X7/NLRP3信号通路蛋白水平。综上所述,三参饮对干燥综合征患者的临床表现有明显的改善作用,其机制与细胞因子水平、调控P2X7/NLRP3信号相关。2.三参饮对SS小鼠颌下腺组织及血清P2X7/NLRP3信号通路的影响三参饮能显著增加SS小鼠体重、增加SS小鼠唾液分泌、唾液指数,降低SS小鼠血清与颌下腺细胞因子水平、改善SS小鼠颌下腺病理改变,抑制SS小鼠颌下腺P2X7/NLRP3信号通路蛋白表达。总之,三参饮能够显著改善SS小鼠症状,其机制与调控P2X7/NLRP3信号相关。3.Ruscogenin对SS小鼠颌下腺组织及腺体细胞P2X7/NLRP3信号通路的影响Ruscogenin可改善SS小鼠的SFR和颌下腺的炎症反应。Ruscogenin促进SS小鼠颌下腺组织腺体细胞的保存,抑制相关炎症体（P2X7R,NLRP3,caspase 1,IL-1β）的表达。Ruscogenin抑制SS小鼠腺体细胞凋亡,并逆转TNF-α诱导的腺体细胞炎症和凋亡,NLRP3过表达逆转了Ruscogenin对TNF-α诱导的腺体细胞活化和凋亡的抑制作用。说明Ruscogenin通过P2X7/NLRP3信号通路改善SS症状。