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目的:
通过对正常对照组、炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)模型组、雷公藤多甙(Tripterygium wilfordii polyglycosidium,TWP)治疗组、奥沙拉嗪钠治疗组各组大鼠肠黏膜损伤的形态学评分、HE染色观察及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、环氧化酶2(Cyclooxygenase-2,COX-2)、I-kappaBα(IκBα)及肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TN-α)、白介素8(Interleukin-8,IL-8)和细胞间粘附分子1(Intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的测定,观察TWP对大鼠实验性结肠炎的疗效,并初步探讨TWP的治疗机制。
材料与方法:
40只健康成年Wistar大鼠,雄性,体重270士20g,喂标准饲料1周后,随机抽取10只作为正常组,标准饲料饮食。余30只大鼠禁食24小时后给予5%氯氨酮(0.2ml/100g)腹腔内注射进行麻醉,用约12cm的聚丙烯导管插入肛门约8cm后,将含30mg的三硝基苯磺酸(2,4,6-Trinitrobenzene sulphonic acid,TNBS)的50%乙醇溶液由肛门一次性注入,使动物平躺,自然清醒、标准饲料饮食。造模后第2天30只大鼠随机分为3组:模型组、雷公藤多甙组、奥沙拉嗪钠组,分别进行灌胃:50mg/kg雷公藤多甙2ml、40mg/kg奥沙拉嗪钠2ml、生理盐水2ml,每日1次,试验期间密切观察大鼠体重变化、大便情况,2周后取血并处死大鼠,取肛门至回盲部结肠,冰生理盐水冲洗,甲醛固定,进行损伤评分;酶联免疫吸附法(ELISA)测定TNF-α、IL-8;流式细胞仪检测ICAM-1;免疫组化检测PPARγ、IκBα、COX-2。应用SPSS13.0软件进行统计处理:
先进行正态分布检验及方差齐性检验,各组间比较应用方差分析或秩和检验,两组间比较应用q检验,指标间进行相关分析。
结果:
与正常组相比,模型组、雷公藤组、奥沙拉嗪钠组造模后第1天均出现懒动、腹泻,大便潜血阳性,甚至部分大鼠出现肉眼脓血便,后逐渐拱背、叫声尖细、毛色无华变脆、扎堆、胡须下垂,出现脱尾现象,活动、进食减少。用药后上述表现表现较轻。
HE染色显示正常组大鼠结肠黏膜光滑无溃疡,结构清晰,腺体排列整齐。模型组大鼠肠黏膜上皮脱落、破损,腺体不完整,可见组织坏死,大量炎症细胞浸润,充血、水肿明显,肠壁不同程度增厚。治疗组溃疡区域明显缩小,炎症细胞减少,肉芽组织显著增生,上皮脱落减轻。
与正常组相比,模型组肠黏膜损伤评分、血清TNF-α、IL-8、ICAM-1的表达水平明显升高,肠道黏膜中PPARγ、IκBα的表达减少,COX-2表达明显增加(P<0.01)。给予雷公藤多甙和奥沙拉嗪钠后,两组血清中TNF-α、IL-8、ICAM-1的水平明显下降,肠道黏膜表达PPARγ、IκBα升高,COX-2明显降低,与模型组有显著性差异(P<0.01),两治疗组各指标间无显著性差别。此外TNF-α、IL-8、ICAM-1、COX-2与肠黏膜损伤评分呈正相关,PPARγ、IκBα表达与损伤评分呈负相关,PPARγ与炎症介质水平呈负相关、与IκBα之间呈正相关(P<0.05)。
结论:
1、TNBS诱导的炎症性肠病肠道黏膜PPARγ表达减少;
2、TNF-α、IL-8、ICAM-1、COX-2的水平反映炎症性肠病的病变程度及药物的治疗效果;
3、雷公藤多甙对炎症性肠病有明确的疗效;
4、雷公藤多甙对炎症性肠病的治疗作用与上调PPARγ有关。