流行性感冒每年不同规模的小流行和若干年一次世界范围的大流行,给人类的身体健康和经济发展带来了严重危害。神经氨酸酶是流感病毒重要的结构蛋白,是诱导体液免疫的关键靶抗原。目前,针对神经氨酸酶的药物主要是神经氨酸酶抑制剂,处于研究阶段的有以神经氨酸酶蛋白为基础的疫苗、以神经氨酸酶基因为基础的核酸疫苗等。由于针对神经氨酸酶基因的流感疫苗研制是比较有发展前景的领域,所以本研究目的是利用基因克隆技术把A/WSN/1933(H1N1)的神经氨酸酶NA1基因克隆到表达载体内,得到有活性的神经氨酸酶蛋白,注射到小鼠体内,使其产生特异性免疫应答,利用单克隆技术得到单克隆并纯化抗体,对抗体进行免疫实验,以获得神经氨酸酶蛋白疫苗。或者是把阳性重组子质粒通过肌肉注射、基因枪等方法导入体内,在体内表达流感病毒抗原蛋白,从而诱导免疫系统对流感病毒抗原发生特异性免疫应答,以获得神经氨酸酶核酸疫苗。本研究利用PCR技术扩增H1N1型流感病毒的神经氨酸酶的cDNA得到相应的DNA,并将PCR产物连接到克隆载体PMD18-T,然后转化到大肠杆菌DH5α,鉴定得到的阳性克隆菌株。然后把NA1基因与表达载体PET21a-d(+)连接并转入到大肠杆菌BL21中,筛选正确的阳性重组子,经酶切和PCR鉴定,证明成功构建了重组载体PET21-NA1,并且利用Ni-NTA琼脂糖纯化获得了神经氨酸酶蛋白质,这为神经氨酸酶蛋白疫苗和神经氨酸酶核酸疫苗的研究打下了重要基础,也促进了人们对H1N1流感病毒的认识和理解,对于防治由H1N1病毒引起的大流感也有一定意义。