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目的:DNA损伤修复反应（DNA damage response,DDR）的平衡对基因组稳定与细胞稳态的维持至关重要。细胞周期检验点激酶2（Cell Cycle Checkpoint Kinase2,CHK2）作为DNA损伤修复应答反应信号通路中重要的一员,在DNA损伤与修复中发挥极其重要的作用。而dNTP的稳态是维持精确地DNA复制和有效的DNA损伤修复所必需的。SAMHD1作为哺乳动物体内发现的第一个dNTP水解酶（dNTPase）,是维系细胞内dNTP含量动态平衡的关键调节因子,提示dNTP水解酶SAMHD1可能参与DNA损伤修复反应。我们近期工作表明,在肠癌HCT116细胞、小鼠胚胎成纤维MEF细胞给予DNA损伤刺激,通过蛋白免疫印迹方法检测DNA损伤修复反应相关标志蛋白和AMHD1磷酸化水平,明确SAMHD1在DNA损伤修复反应中磷酸化水平变化。对稳定沉默和过表达SAMHD1基因的细胞给予DNA损伤刺激,分析SAMHD1对DNA损伤修复反应的调控作用;通过加入CHK2小分子抑制剂,明确SAMHD1的磷酸化是受CHK2磷酸化的调控。结果表明CHK2通过磷酸化修饰SAMHD1调控DNA损伤修复反应。本研究以探索CHK2磷酸化修饰dNTP水解酶SAMHD1,调控DNA损伤修复,维系基因组稳定与细胞稳态的作用机制,为临床治疗稳态失衡相关疾病发现新的干预靶点。方法:1.利用人结肠癌HCT116细胞、小鼠胚胎成纤维MEF细胞给予DNA损伤刺激（Cisplatin、Etoposide、H2O2、DOX、等）,通过蛋白免疫印迹Western Blot方法检测DNA损伤修复反应相关标志蛋白（ATM,P-ATM,CHK2,P-CHK2,γH2AX等）和dNTP水解酶SAMHD1的磷酸化水平,明确SAMHD1在DNA损伤修复反应中磷酸化水平发生改变。2.分别对稳定沉默和过表达SAMHD1基因的细胞给予（Cisplatin、Etoposide）两种DNA损伤刺激,通过Western Blot检测DNA损伤的标志性指标,解析SAMHD1对DNA损伤修复反应的调控作用。同时利用流式细胞术检测了沉默表达SAMHD1细胞和过表达SAMHD1细胞的细胞凋亡水平及运用实时无标记细胞分析（RTCA）技术和细胞计数检测方法,监测了沉默表达SAMHD1细胞和过表达SAMHD1细胞的细胞增殖水平,明确SAMHD1通过调控DNA损伤修复反应对细胞命运的影响。3.在稳定沉默CHK2的细胞中,通过免疫沉淀方法检测SAMHD1的磷酸化及DNA损伤相关标志指标,证实SAMHD1磷酸化水平的改变的确影响DNA损伤修复,并且SAMHD1的磷酸化修饰,受CHK2调控;通过加入CHK2小分子抑制剂,明确SAMHD1的磷酸化是受CHK2 T68位点磷酸化的调控。结果:1.SAMHD1参与DNA损伤修复反应,DNA损伤刺激条件下SAMHD1磷酸化修饰增强。2.SAMHD1参与调控DNA损伤修复反应和细胞功能。3.DNA损伤修复反应过程中,CHK2通过磷酸化修饰SAMHD1调控DNA损伤修复。结论:细胞周期检验点激酶2通过磷酸化修饰SAMHD1调控DNA损伤修复反应