论文部分内容阅读
第一部分静脉注射甘露醇对家兔血脑屏障开放的影响目的:验证静脉注射甘露醇能否促进血脑屏障开放。方法:本文采用伊文思蓝染色法,验证静脉注射甘露醇能否促进血脑屏障开放。普通级健康家兔12只,随机分为2组（甘露醇组、对照组）,每组6只。待动物麻醉后,静脉注射2%伊文思蓝(3 m L·kg-1)。10 min后,甘露醇组静脉注射20%甘露醇注射液(4.90 g·kg-1,0.1 m L·s-1);对照组注射等体积的0.9%氯化钠注射液。伊文思蓝循环1 h后,进行心脏灌注,后断头取全脑,观察脑组织蓝染情况。称量脑组织的湿重,用甲酰胺提取伊文思蓝,并在620 nm处,用分光光度计测定其吸光度值。根据标准曲线计算出伊文思蓝的含量,2组结果均以每克脑组织中伊文思蓝含量(μg·g-1)表示,采用SPSS 21.0软件进行统计学处理。结果:伊文思蓝的标准曲线方程为Y=0.007X-0.0002,R2=0.9998,表明伊文思蓝在2.5～100μg·m L-1浓度范围内线性关系良好。与对照组相比,甘露醇组脑组织蓝染更加明显,伊文思蓝的含量也有显著性差异。结论:静脉注射甘露醇能促进血脑屏障开放。第二部分HPLC法测定家兔脑脊液中万古霉素的浓度目的:建立家兔脑脊液中万古霉素浓度检测的HPLC法。方法:检测条件:Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相:甲醇-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾缓冲溶液（磷酸调p H=3.2）（17:83,V/V）;流速:1.0 m L·min-1;柱温:30℃;检测波长:236 nm;进样量:20μL;内标:去甲万古霉素。家兔脑脊液样品采用4%高氯酸溶液沉淀蛋白质。分别对该检测方法的专属性、线性、检测限和定量限、提取回收率和方法回收率、日内精密度和日间精密度、样品处理后室温放置稳定性、样品低温保存稳定性及反复冻融稳定性进行考察。结果:家兔脑脊液中内源性物质不干扰万古霉素及内标的测定。万古霉素及内标峰型良好、分离完全,保留时间分别为11.2 min和14.3 min。万古霉素的标准曲线方程为Y=0.536X+0.020（R2=0.9996）,线性范围为0.25～10μg·m L-1。万古霉素的提取回收率为93.80%～101.2%,内标去甲万古霉素的提取回收率为（98.09±0.04）%,万古霉素的方法回收率为90.98%～99.70%;日内精密度和日间精密度的RSD值均小于15%。脑脊液样品处理后室温放置8 h、-40℃低温保存7天、反复冻融3次后稳定性均良好。结论:本研究建立了用于测定家兔脑脊液中万古霉素浓度的HPLC法。该方法具有操作简单、分析快速、专属性良好的优点,适用于家兔脑脊液中万古霉素浓度的测定,为后续研究甘露醇对万古霉素脑脊液药动学的影响奠定了方法学基础。第三部分甘露醇对万古霉素血脑屏障透过能力及脑脊液药动学的影响目的:探究不同剂量甘露醇静脉注射后对于万古霉素血脑屏障透过能力及脑脊液药动学的影响。方法:取家兔24只,随机分为3组（低剂量组、高剂量组、对照组）,每组8只。于给药后不同时间从小脑延髓池抽取脑脊液,用4%高氯酸溶液沉淀蛋白,采用HPLC法测定脑脊液中万古霉素的浓度。采用DAS 2.1.1软件拟合脑脊液药-时曲线,计算药动学参数,并采用SPSS 21.0软件进行统计学处理。结果:低剂量组、高剂量组和对照组万古霉素的主要药动学参数:AUC0-12h分别为（22.83±5.23）mg·h·L-1,（27.46±2.90）mg·h·L-1和（21.30±4.71）mg·h·L-1;AUC0-∞分别为（32.22±14.71）mg·h·L-1,（37.65±12.20）mg·h·L-1和（32.63±12.26）mg·h·L-1;t1/2分别为（5.50±2.89）h,（5.90±2.89）h和（7.28±4.67）h;Tmax分别为（2.21±0.80）h,（1.88±0.84）h和（2.50±0.76）h;Cmax分别为（3.35±0.38）mg·L-1,（4.62±0.62）mg·L-1和（2.93±0.49）mg·L-1。与对照组相比,低剂量组万古霉素脑脊液浓度和主要的药动学参数均无显著变化;而高剂量组万古霉素的AUC0-12h,AUC0-∞和Cmax分别增加28.92%,15.38%和57.46%（P<0.05）,在1、2、3 h时间点处脑脊液中的药物浓度分别增加81.25%,65.48%和33.09%（P<0.05）。结论:静脉注射高剂量甘露醇可以促进万古霉素透过家兔的血脑屏障,提高中枢神经系统中万古霉素浓度。