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G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptors,GPCRs）是一大类通过G蛋白介导其生物效应的膜受体总称。GPCR是迄今最重要的新药研究靶点,据统计,以GPCR为靶点的新药数量约占药物市场的40%。通常,将核苷酸序列已知而配基和功能尚未确定的GPCRs称为孤儿GPCRs（orphan GPCRs,oGPCRs）,记为oGPCRs。对oGPCRs而言,寻找其内、外源性配基已成为oGPCRs研究的重点和难点,一旦突破,无论对于揭示其生理功能和病理意义,还是对于以此为靶点研发相关疾病新的防治药物均具有重大意义。 本研究根据已有文献资料和相关数据库提供的信息,成功克隆了一个人源oGPCR新成员,（GeneBank登录号为AB083598）,命名为hGPCRc。我们首先利用RT-PCR从人结肠组织获得hGPCRc的氨基酸编码cDNA序列,然后又以健康志愿者外周血细胞基因组DNA为模板进行PCR扩增,得到了同样大小的DNA序列,经测序比较两者为同一基因序列,表明该受体的基因没有内含子,符合多数GPCRs基因缺乏内含子的规律;运用生物信息学手段,利用NCBI网站提供的相关软件进行分析,结果表明,hGPCRc位于人染色体13q32.2,与小鼠、大鼠的对应物序列同源性高达85%,但与人源其他已知基因的同源性较低,对应的氨基酸序列组成了七个跨膜区段的结构域;进化树分析显示与已知人P2Y1同源性最高也仅为36%,显然,hGPCRc属于人类oGPCRs的新成员。 为了深化对hGPCRc的认识,我们以RT-PCR检测hGPCRc基因在人体部分组织器官的表达情况。结果表明,hGPCRc在胎儿较多组织均有表达,其中以肾脏、心脏和结肠等最高,推测hGPCRc很可能参与广泛的生理或病理过程,提示该受体可作为多种疾病防治靶点的潜在可能性。另外,用构建的GFP-hGPCRc融合表达载体转染CHO-K1细胞系,转染细胞继续培养一周后,在激光扫描共聚焦显微镜下观察,结果显示GFP-hGPCRc转染细胞的荧光清晰聚集于细胞膜上,证实hGPCRc蛋白位于细胞膜并稳定表达。 目前,最常用的配基筛选策略之一是基于oGPCRs表达工程细胞株第二信使的检测。为筛选hGPCRe的特异性配基,必需建立符合hGPCRc配基检测要求的体系,再从化合物库或人源组织提取物筛选其可能的配基。由于hGPCRc与P2Y1同源性的最高,因此推测其与Gq偶联的可能性最大,而Gq介导的效应为增加细胞内钙离子浓度,后者作为第二信使进一步完成相应的生理功能和生化反应过程。鉴于此,本