兜兰属植物离体繁殖和系统学研究

来源 :中国科学院昆明植物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fengrui0216
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全世界兜兰属(Paphiopedilum)植物总数为85种,中国是世界上兜兰属植物种类最丰富的国家之一,占了全世界的1/3,共29种。由于兜兰属中许多种类具有很高的观赏价值,导致资源破坏十分严重,一些种类已濒临灭绝。2004年出版的《中国物种红色名录》第一卷里,18种兜兰属植物中有5种被列为极危种,12种被列为濒危种。早在1997年制定的《华盛顿公约》(即《濒危野生动植物种国际贸易公约》,Convention on International Trade in Endangered Species ofWild Fauna and Flora,简称为CITES),所有兜兰被列入附录Ⅰ,属于绝对禁止国际贸易的物种。   本文从蒴果成熟度、培养基无机盐浓度和有机添加物、激素浓度入手,来探讨对兜兰属植物离体繁殖的最佳途径;研究兜兰花粉的寿命,外源的钙和硼对兜兰花粉萌发的影响;通过对兜兰属离体保存技术的研究,探索兜兰属植物离保存技术的最佳手段和方法,制定兜兰属植物保存规范;从形态学、分子生物学方面对兜兰属的系统学进行初步研究,对其亚属和组的划分、种间关系以及一些种的归属问题进行探讨。主要研究结果如下:   1.中国兜兰属植物离体繁殖技术的研究   对20种兜兰属植物进行离体繁殖技术的研究。以密毛兜兰为代表,实验结果证实了种子成熟度、培养基、碳源、天然添加剂对密毛兜兰种子萌发、原球茎和植株生长有明显影响:120 d、130 d、140 d种子不能萌发;随着种子每推迟10 d成熟,种子萌发率随之提高;200 d的种子达到萌发最高点;在KC培养基接种40 d达到最高萌发率,而VW培养基的原球茎直径最长;葡萄糖有利于种子萌发和叶的生长,其次是蔗糖、麦芽糖和甘露醇;10%椰子汁是最好的种子萌发天然添加剂,而土豆泥、苹果泥有利于叶的生长,相对差的是佛手瓜泥和LH。以密毛兜兰、巨瓣兜兰、波瓣兜兰、杏黄兜兰为例,证明了激素浓度对兜兰的芽繁殖率有显著影响:密毛、波瓣兜兰在BA5.0 mg l-1+NAA0.5 mg l-1,BA1 mgl-1+NAA0.5 mg l-1水平能达到增殖率100%;BA5.5 mg l-1+NAA0.5 mg l-1组合能使巨瓣兜兰达到增殖率为33%;每种激素水平都能使杏黄兜兰得到增殖,最高增殖率发生在BA4 mg l-1+NAA0.1 mg l-1为200%(2.0芽/节间)。通过我们的实验方法,同样地成功离体繁殖和保存了另外15种兜兰属植物,以及1个自主杂交品种♀P.delicatum×♂P.coccineum:卷萼兜兰、硬叶兜兰、巨瓣兜兰、同色兜兰、紫毛兜兰、紫纹兜兰、白花兜兰、长瓣兜兰、带叶兜兰、亨利兜兰、麻栗坡兜兰、包氏兜兰、浅斑兜兰、根茎兜兰、红旗兜兰。而且,在3个月内,1/4 MS medium+BA2 mg+NAA0.2 mg l-1,KT2 mg+NAA0.2 mg l-1分别使麻栗坡兜兰和长瓣兜兰增殖3倍和4倍。   2.中国兜兰属植物的花粉离体萌发   研究5种兜兰(格丽兜兰、波瓣兜兰、紫毛兜兰、长瓣兜兰、红旗兜兰)花粉的寿命,外源的钙和硼对兜兰花粉萌发的影响。在培养基缺糖、缺钙条件下,花粉都不萌发。虽然缺硼的培养基下,花粉仍会有极微量的萌发,但几乎可以忽略不计。在液体布氏培养基上,2个月、3个月成熟度的花粉依然可以萌发,与新鲜的20天的花粉萌发率没有多大区别。兜兰植物花粉管伸长需要的时间较长,一般要等到第4天、第5天。少数花粉在24小时以后才开始萌发,完全没有在24小时前萌发的花粉。所以在人工授粉后,五天内尽量不要浇水,以免柱头和花药聚集水分,导致霉菌容易生长,不利于花粉的萌发。   3.兜兰属植物离体保存技术的研究   在4℃保存兜兰幼苗,1个月以内取出复壮,恢复的状况比较好,超过1个月,植株就容易受到冻害。15℃的条件下,植株长势的缓慢,平均18个月继代1次,可以起到延缓继代周期的目的。   通过对兜兰属15个种(含自主杂交品种1种)的离体保存技术的研究,我们制定了兜兰属植物离体保存规范。   4.分子系统学研究   基于ITS序列的数据对兜兰属70个种的研究,结合RAPD对于中国兜兰30个种的研究结果进行分析,支持唐沢耕司(1982)所提出的将兜兰属分为6个亚属的观点,其中产于中国的兜兰属植物可以划分为5个亚属:Sigmatopetalum,Paphiopedilum,Parvisepalum、Brachypetalum和Polyantha。①杏黄兜兰、硬叶兜兰、麻栗坡兜兰、白花兜兰和德氏兜兰为亚属Parvisepalum的成员;②长瓣兜兰和飘带兜兰所在的Pardalopetalum组升为亚属Polyantha;⑨同色兜兰、文山兜兰和巨瓣兜兰所在的Concolaria组升为亚属Brachypetalum;④Barbata组(即彩云兜兰、紫纹兜兰、胼胝兜兰、卷萼兜兰所在的组)升为亚属Sigmatopetalum;⑤Paphiopedilum亚属包括紫毛兜兰以及其变种包氏兜兰和密毛兜兰、根茎兜兰、波瓣兜兰、小叶兜兰和带叶兜兰等。   9个RAPD引物在中国兜兰属32个个体中总共扩增出产生99条可区分的DNA条带,根据种间的遗传相似系数和遗传距离的结果分析,巧花兜兰与海伦兜兰的遗传距离为0.3466,相似系数为0.7071。RAPD聚类图和ITS树状图显示,这两个种并没有聚成一支,而是远远的分开,并不是一个单系。因此,我们认为巧花兜兰不能并入海伦兜兰中,最多可以作为其变种处理,或者独立成种,隶属于兜兰亚属的Paphiopedilum兜兰组。   与海伦兜兰同样,将文山兜兰归并到巨瓣兜兰或同色兜兰中,也是不合理的。RAPD遗传相似度表明:文山兜兰与同色兜兰的相似系数为0.2384,与巨瓣兜兰的为0.3324,亲缘关系较近。但不至于为同一个种。因此,不支持将文山兜兰并入巨瓣兜兰或者同色兜兰中,可以作为是其变种处理,隶属于Concoloria组。   海伦兜兰、根茎兜兰和陈莲兜兰在亚属等级的归并还没有文献报道,在我们基于ITS序列的邻接树和严格一致树以及RAPD聚类图的结果,这几个种都嵌套在兜兰亚属的分支中,因此我们支持将这些种划分入兜兰亚属。
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