目的:研究蟾酥提取物bufalin通过调节小鼠背根神经节(dorasal root ganglion,DRG)T-型钙通道参与神经病理性痛及作用机制。方法:应用坐骨神经分支选择性损伤模型(spared nerve injury model,SNI)研究bufalin对小鼠行为学的作用。应用电生理技术研究bufalin在假手术组(Sham)组和手术组(SNI)中对T-型钙通道电流的作用。在离体水平探究bufalin对T-型钙通道三个亚基Cav3.1、Cav3.2和Cav3.3电流的作用。应用药理学方法研究其信号通路作用机制。结果:1)行为学结果显示,鞘内注射(L4-6)10 nM-100 nM的bufalin可缓解SNI引起的机械痛、热痛和CFA引起的炎症痛反应。注射T-型钙通道阻断剂Z941和TTA-P2后产生类似作用。2)电生理研究结果显示,bufalin对神经病理性疼痛小鼠DRG神经元T-型钙电流具有显著的抑制作用。与Sham相比,SNI组小鼠L4-6 DRGs中T-型钙通道电流的浓度效应曲线和失活曲线的EC500值比Sham组分别低67和100倍,并且bufalin促进各组中T-型钙通道的失活。3)在药理学研究中,预先加入蛋白激酶C(PKC)抑制剂GF109203X和chelerythrine chloride消除了bufalin对小直径DRG神经元中T-型钙电流的抑制作用,而加入蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89和PK16-22以及经典蛋白激酶C(classical PKC)抑制剂Ro31-8820则未引起这种作用。此外,预先孵育PKCδ特异性抑制剂Rottlerin后翻转了 bufalin对T-型钙通道的抑制作用,而电极内加入PKCe抑制剂,PKCη抑制剂和PKCε抑制剂则不能阻断bufalin对T-型钙通道的抑制作用。4)在外源表达体系中,bufalin对Cav3.2 T-型通道电流有较强的抑制作用,但对Cav3.1和Cav3.3电流无影响。5)免疫细胞化学和免疫印迹结果显示,预先用bufalin孵育DRG神经元后,能引起PKCδ发生转位现象。结论:Bufalin通过PKCδ信号通路选择性抑制DRG神经元中Cav3.2电流,并可缓解由SNI诱导的机械痛和热痛觉过敏。