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结肠癌是临床上常见的消化系统恶性肿瘤,当前以外科手术与化疗为主的综合治疗效果仍不理想,治疗后仍有约50%以上的患者出现复发与转移。因此,寻找新的治疗靶点与治疗策略以进一步改善患者预后,是目前结肠癌治疗中亟需解决的问题。钙离子(Ca2+)作为重要的第二信使参与调节许多细胞基本生理功能,并与肿瘤的浸润、转移和血管生成等恶性表型密切相关。细胞内钙离子稳态的维持依靠细胞内钙库Ca2+的释放与细胞外Ca2+的内流。钙库操纵性Ca2+内流(store-operated calcium entry, SOCE)是Ca2+进入肿瘤细胞内的主要方式,靶向SOCE的抑制剂有望成为新的抗肿瘤药物。SKF-96365是钙库操纵性钙内流抑制剂,能够明显抑制非兴奋细胞中的SOCE过程。研究发现SKF-96365能够抑制多种肿瘤细胞的增殖。目前,SKF-96365在结肠癌中的抗肿瘤作用及其分子机制尚不清楚。目的研究SKF-96365对结肠癌细胞的抗肿瘤作用,及对细胞周期、凋亡、自噬水平的影响；分析SKF-96365抗肿瘤作用可能的分子机制及自噬在此过程中所发挥的作用；在此基础上观察抑制自噬是否增加结肠癌细胞对SKF-96365的敏感性。方法通过激光共聚焦显微镜观察SKF-96365对结肠癌细胞SOCE过程的影响；MTS检测SKF-96365对结肠癌细胞存活的影响；流式细胞仪、Western blot等方法观察SKF-96365对细胞周期和凋亡的影响；Western blot、免疫荧光与透射电镜等方法观察SKF-96365处理对结肠癌细胞自噬相关蛋白表达及自噬体形成的影响；抗体芯片及生物信息学分析SKF-96365处理后结肠癌细胞中重要信号通路的表达变化情况；MTS方法检测,自噬抑制剂或下调自噬调控基因Beclinl抑制自噬对SKF-96365抗肿瘤作用的影响；采用流式细胞仪检测抑制自噬前后细胞凋亡率的变化；建立结肠癌裸鼠移植瘤模型验证自噬抑制剂对SKF-96365的增敏作用。结果SKF-96365能够抑制结肠癌细胞株SOCE介导的钙离子内流,并能有效抑制HCT116与HT29细胞生长,其机制在于诱导结肠癌细胞G2/M期阻滞和凋亡。同时,我们发现SKF-96365可以诱导结肠癌细胞自噬,并证实SKF-96365诱导的自噬先于凋亡发生。自噬通过抑制细胞色素c从线粒体的释放,从而延缓凋亡的发生,为细胞提供保护。为进一步明确SKF-96365诱导结肠癌细胞凋亡及自噬的分子机制,我们采用抗体芯片检测SKF-96365作用前后细胞内主要信号传导通路的变化,发现SKF-96365能够显著抑制AKT/mTOR信号通路。结合生物信息学分析,我们预测并证实钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱγ亚型(CaMKIIγ)在SKF-96365抗肿瘤过程中起到关键作用,其可以磷酸化AKT S473位点,进而激活AKT/mTOR信号通路。而AKT/mTOR信号通路在肿瘤增殖、凋亡及自噬过程中发挥了重要作用。过表达CaMKIIγ或AKT1,可以减弱SKF-96365诱导的肠癌细胞自噬与凋亡水平。体外研究表明,抑制自噬可以提高SKF-96365对结肠癌细胞的生长抑制作用。不同浓度的SKF-96365联合自噬抑制剂CQ或3-MA作用于HCT116和HT29细胞后,对其抑制作用显著高于SKF-96365单药组,(p<0.001)。以siRNA Beclinl转染HCT116和HT29细胞,也能够显著提高肿瘤细胞对SKF-96365的敏感性。流式细胞仪检测结果显示与SKF-96365单药处理相比,联合CQ和3-MA时,细胞凋亡率显著增加(p<0.05),但对于SKF-96365诱导的G2/M期阻滞未见明显作用。裸鼠移植瘤结果表明自噬抑制剂HCQ可以增加SKF-96365对HCT116移植瘤的抑制作用。SKF-96365联合HCQ组肿瘤体积较对照组缩小约48.4%,且未观察到明显毒性反应。与体外研究结果一致,Western blot与免疫组化检测发现,SKF-96365处理组微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达水平明显升高。SKF-96365联合HCQ组较SKF-96365单药组凋亡更为明显。同时我们进一步证实,SKF-96365抑制了肿瘤组织中CaMKIIγ/AKT/mTOR信号通路的激活。结论SKF-96365能够明显抑制结肠癌细胞SOCE介导的钙离子内流,从而抑制结肠癌细胞生长,其机制是通过抑制钙离子/CaMKIIγ/AKT信号传导通路,导致细胞周期阻滞、凋亡与自噬。抑制自噬促进SKF-96365在体内外对结肠癌细胞的生长抑制作用,提高细胞凋亡率。SOCE抑制剂SKF-96365联合自噬抑制剂有可能成为结肠癌的一种新的治疗策略。