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目的:研究莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对膀胱癌细胞转移的影响及分子机制。
方法:以体外培养的人膀胱癌细胞系T24为研究模型,运用粘附实验、划痕实验、趋向运动实验、侵袭实验研究莱菔硫烷对T24细胞异质粘附、随机运动、趋向运动、侵袭能力的影响。采用免疫蛋白印迹法(Western Blot)检测莱菔硫烷对细胞粘附分子-1(intercellular adhesion molecule1,ICAM-1)、血管粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule1,VCAM-1)和E-钙粘蛋白(E-cadherin)的影响;逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测莱菔硫烷对E-钙粘蛋白、ZEB1、Snail mRNA的影响。采用过表达质粒(pcDNA3.1-COX-2/MMP-2/MMP-9)研究莱菔硫烷抑制T24细胞上皮间质转化的信号途径。
结果:莱菔硫烷(5.20μmol/L)能明显降低T24细胞对基质胶、基质层粘连蛋白、纤维粘连蛋白的粘附率;莱菔硫烷呈浓度和时间依赖性的降低T24细胞的随机运动能力;20μmol/L莱菔硫烷处理24h后抑制作用最明显;莱菔硫烷对T24细胞的侵袭能力有明显的抑制作用,其中10、20μmol/L莱菔硫烷抑制作用最明显;5、10、20μmol/L莱菔硫烷对T24细胞的趋向运动能力有明显的抑制作用;莱菔硫烷能增加E-钙粘蛋白(E-cadherin)mRNA及蛋白的表达,减少细胞粘附分子-1(ICAM-1)、血管粘附分子-1(VCAM-1)蛋白的表达,降低ZEB1、SnailmRNA的表达,并呈剂量.效应关系。COX-2/MMP-2、9过表达能明显抑制E-钙粘蛋白mRNA的水平,但不能完全阻断莱菔硫烷对E-钙粘蛋白的诱导及转录抑制因子ZEB1、Snail的抑制作用。
结论:莱菔硫烷可抑制膀胱癌转移过程,其作用机制与抑制上皮间质转化(EMT)过程和COX-2/MMP2、9途径密切相关。