mir-203调节结直肠癌sw620细胞增殖、迁移和侵袭能力的研究

来源 :南华大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:huayuaneee
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目的:运用细胞增殖、细胞迁移、侵袭和裸鼠皮下成瘤实验检测mir-203上调对结直肠癌细胞细胞增殖、转移能力的影响。依据生物信息学预测结果,通过实时定量PCR技术预测mir-203的靶基因。阐明mir-203在结直肠癌细胞增殖及转移过程中的机制。方法:1)设计并构建慢病毒载体LC/has-mir-203a、LV/NC,包装后感染sw620细胞,加入嘌呤霉素筛选并得到稳定转染的结直肠癌细胞株sw620/LV-hsa-mir-203a(sw620+mir-203a)、sw620/LVNC(sw620+NC)。实验分别设置过表达组(sw620/LV-hsa-mir-203a)、阴性病毒空载体对照组(sw620/LV-NC)及空白对照组。并应用实时荧光定量PCR技术检测在上述3组中mir-203的表达丰度,检验转染效果。2)分别采用CCK8细胞增殖实验、trasnswell小室迁移、侵袭实验检测mir-203上调对细胞增殖、转移能力等影响。采用可视化动物模型,进一步观察mir-203对裸鼠皮下成瘤大小的影响。3)RT-PCR法检测3组结直肠癌sw620细胞P110α、AKT1及ERK2的信使RNA的表达。结果:1)实时荧光定量PCR结果表明,过表达组(29.06±0.76)细胞中mir-203丰度明显比空白对照组(1±0)、阴性病毒空载体对照组(1.05±0.09)高。组别间主效应具有统计学意义(F=4098.452,P<0.001),即三组间的指标具有统计学差异,进行两两组间比较发现,miRNA203a在过表达组(sw620/LV-has-mir-203组)的指标是最高的。2)CCK8细胞增殖实验提示sw620/LV-hsa-mir-203a细胞增殖能力较sw620、sw620/LV-NC明显下降,具有统计学差异(F=145.243,P<0.001)3组的细胞生长曲线都是在不断增大的,随着时间的变化,sw620/LV-hsa-mir-203a增长速度相对其他两组稍微慢一些,mir-203上调能够抑制结直肠癌细胞体外增殖能力。3)Transwell小室细胞迁移:sw620/LV-hsa-mir-203a细胞穿膜的细胞数目38.83?4.44个明显少于sw620细胞数目131.83?2.63个及sw620/NC细胞数目133.50?3.08个,具有统计学差异(p<0.001),空白对照组和空载体对照组细胞组不具有显著差异(p>0.05)。以上结果说明,mir-203上调能够抑制sw620细胞迁移能力。4)Transwell小室细胞侵袭实验:sw620/LV-hsa-mir-203a细胞穿膜的细胞数目10.16?1.72个少于sw620细胞数目46.16?4.70个及sw620/NC细胞数目51.83?2.04个,具有统计学差异(p<0.05),而sw620细胞组和sw620/NC细胞组不具有显著性差异(p>0.05)。以上结果说明,mir-203上调能抑制细胞侵能力。5)裸鼠皮下成瘤实验:分别接种sw620/lv-hsa-mir-203、sw620/NC和sw620细胞与裸鼠皮下,从第3周开始,连续5周观察裸鼠皮下移植瘤大小,sw620/lv-hsa-mir-203组移植瘤体积明显小于其它两组,差异有统计学意义(P<0.05)。并且与其它两组比较,sw620/lv-hsa-mir-203组皮下肿瘤生长速度减慢(p<0.05)。6)qPCR靶基因预测:与sw620/lv-hsa-mir-203细胞中p110a,ERK2,AKT1 mRNA表达水平明显较sw620/NC和sw620细胞偏低,可能是mir-203抑制上述基因mRNA有关。结论:1)mir-203上调抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。2)mir-203可能介导P110α、AKT1、ERK2基因的表达调节结直肠癌的增殖和转移。
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