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目的建立人弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)耐糖皮质激素(glucocorticoids,GC)细胞系Toledo/DEX,并对其生物学特性及耐药机制进行初步研究。方法以地塞米松(dexamethasone, DEX)为诱导剂,用长期间歇小剂量GC递增法诱导耐药细胞系。将对数期Toledo细胞接种于培养瓶,置于含DEX起始浓度为1×10-8M的培养液中培养96小时后,改为不含药物的培养液培养,待细胞增殖再次进入对数生长期,提高DEX浓度1倍,直至在含DEX1.024×10-5M的浓度中稳定生长。用CCK-8法检测不同暴露时间及不同浓度的DEX对耐药细胞及亲本细胞增殖抑制作用的差异,同时检测耐药细胞及亲本细胞对DEX的药物敏感性,计算耐药指数。将耐药细胞脱离DEX作用后检测其耐药稳定性。观察耐药细胞系和亲本细胞系的生物学特性。通过光学显微镜观察细胞一般形态学变化,透射电子显微镜观察细胞超微结构变化；CCK-8法测定倍增时间及耐药指数,绘制生长曲线；利用流式细胞仪检测细胞免疫表型；采用常规细胞遗传学方法,R显带后进行核型分析；利用流式细胞仪检测细胞周期比例,了解细胞周期分布。观察两种细胞在裸鼠成瘤性的差异。western blot方法检测GRα/β蛋白表达的变化。结果历经6月的培养,建立了耐药细胞系Toledo/DEX,并对耐药细胞进行生物学特性观察。形态上,耐药细胞与亲本细胞相似,悬浮生长,细胞大小不均一,呈圆形或椭圆形,体积较正常的淋巴细胞大,胞浆少,细胞核大,占据大部分细胞体积,且大小不一。经瑞氏染色在光学显微镜下观察,可见两种细胞形态无明显差异,油镜下形态与Burkitt淋巴瘤细胞形态相似,细胞胞体偏大,形态不规则,核／浆比例增高,胞浆淡蓝色,浆内见空泡。核不规则,可见多个核仁及核裂。透射电镜观察,耐药细胞Toledo/DEX超微结构与Toledo大体一致,不同点是其局部可见片层状突起,有细长微绒毛。流式细胞仪分析细胞免疫表型示两种细胞完全一致,均为CD2-、CD3-、CD5-、CD7-、CD10+、CD19+、CD79α+、CD20+、CD38+、CD16-、CD56、CD22-。R显带行染色体核型分析示耐药细胞除亲本细胞的染色体变异外,还存在1、4、7、10号染色体异常,但均未形成两个相关的克隆。细胞生长曲线示耐药细胞细胞增殖速度比亲本细胞缓慢。PI检测细胞周期分布发现耐药细胞G1期细胞增多,而S期和G2期细胞减少。两种细胞裸鼠成瘤率为0%。耐药谱分析示耐药细胞相对于亲本细胞,对地塞米松、阿霉素(adriamycin,ADM)、环磷酰胺(cyclophosphamide, CTX)和长春新碱(vincristine, VCR)的耐药指数分别为1227倍、2.05倍、2.63倍和1.86倍,其中对DEX和CTX耐药性的提高具有统计学意义。Western Blot检测GRα、GRβ蛋白的表达,结果示GRα、GRβ蛋白在Toledo和Toledo/DEX细胞均表达。耐药细胞GRα表达下调,且随着耐药倍数的增高而下降。同时耐药细胞GRβ表达上调,且随着耐药倍数的增高而明显上升。结论采用长期间歇小剂量DEX递增诱导法,成功建立了糖皮质激素耐药指数为1227倍的Toledo/DEX细胞系。该诱导耐药的方法可行性强,诱导时间短。研究还表明GRα、GRβ蛋白表达的改变是Toledo/DEX细胞糖皮质激素耐药的机制之一