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目的:本研究采用全血流式细胞术(FCM)三色免疫荧光分析,选择血小板膜表面纤维蛋白原受体(FIB-R),P-选择素(CD62P)作为静脉全血中活化血小板的分子标志物,对新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)中血小板的变化进行监测,判断血小板的功能状态,同时检测血小板计数(PLT)和血小板平均体积(MPV)。研究血小板各项指标特别是纤维蛋白原受体及P-选择素与NEC病情进展的关系,探讨血小板功能状态在坏死性小肠结肠炎发病中的临床意义,以期在一定程度上指导NEC的早期诊断、治疗、疗效监测和预后判断。方法:以血小板表面识别FIB-R的单克隆抗体(PAC-1),CD62P作为分子标志物,FCM三色荧光标记检测NEC高危患儿、早期患儿、典型患儿和对照组静息状态及活化状态血小板表面标志物PAC-1、CD62P表达百分率的变化,同时用血细胞分析仪检测各组血小板计数(PLT)和血小板平均体积(MPV)的变化。使用SPSS统计软件统计各组数据。结果:1.静息状态下,与对照组比较,NEC早期和典型患儿组PAC-1和CD62P表达率均有所升高(p＜0.05,p＜0.01),高危患儿组PAC-1和CD62P表达率差异均无统计学意义(p＞0.05);与早期患儿比较,典型患儿组CD62P表达率有所升高(p＜0.01),典型患儿组PAC-1表达率差异无统计学意义(p＞0.05);NEC典型患儿经内科保守治疗2～3周后,PAC-1和CD62P表达率较之治疗前都有所降低(p＜0.05,＜0.01)。2.活化状态下,各组样本PAC-1,CD62P表达率较之静息状态下均有所升高(p＜0.05,p＜0.01),ADP激活后血小板膜表面PAC-1和CD62P表达呈正相关(r=0.551,p＜0.01);与对照组比较,NEC早期和典型患儿组CD62P表达率有所升高(p＜0.01),典型患儿组PAC-1表达率有所升高(p＜0.05),早期患儿组PAC-1表达率差异无统计学意义(p＞0.05),高危患儿组PAC-1和CD62P表达率差异均无统计学意义(p＞0.05);与早期患儿组比较,典型患儿组CD62P表达率有所升高(p＜0.01),典型患儿组PAC-1表达率差异无统计学意义(p＞0.05);NEC典型患儿经内科保守治疗2～3周后,PAC-1和CD62P表达率较之治疗前都有所降低(p＜0.05,＜0.01);与对照组比较,NEC早期和典型患儿组ADP活化后CD62P表达增高幅度均更大(p＜0.05),高危患儿组ADP活化后CD62P表达增高幅度差异无统计学意义(p＞0.05);与早期患儿组比较,典型患儿组ADP活化后CD62P表达增高幅度差异无统计学意义(p＞0.05)。3.与对照组比较,NEC早期和典型患儿组PLT计数都有所降低(p＜0.05),高危患儿组PLT计数差异无统计学意义(p＞0.05);与早期患儿组比较,典型患儿组PLT计数有所降低(p＜0.05);与对照组比较,NEC早期患儿组MPV有所扩大(p＜0.05),高危患儿组MPV差异无统计学意义(p＞0.05);典型患儿经内科保守治疗2～3周后,较之治疗前PLT计数有所升高(p＜0.05)。结论:1.选择血小板膜表面FIB-R、CD62P作为血液中循环活化血小板(CAP)的分子标志物,用抗活化血小板单克隆抗体(McAb)作探针,经三色免疫荧光标记,应用全血流式细胞术(FCM)来进行检测,能灵敏、特异的检测血小板活化标志物,准确的反应血小板的活化水平,为临床评价血小板活化程度提供早期可靠的诊断指标。2.流式细胞术三色荧光标记检测PAC-1、CD62P的表达率能为存在危险因素的新生儿发生NEC的早期诊断、病情发展及疗效监测提供可靠但非特异性实验室数据,特别是CD62P对判断病变的进展更有意义;另外,PLT在NEC患儿有明显降低,经治疗后有所回升,MPV在NEC患儿期有明显增大,经治疗后有所减小,说明两者可作为NEC早期诊断、病情发展及疗效监测的实验室指标。3.ADP体外活化后各组PAC-1和CD62P阳性表达都增高明显,且PAC-1和CD62P表达呈正相关,表明两者均可作为活化血小板的分子标志物;NEC患儿CD62P表达增高幅度更为明显,可见NEC患儿血小板更容易活化,活化程度更高。