毛竹笋头中β-谷甾醇的提取分离研究

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植物甾醇作为高活性的天然物质,具有抗癌、抑制肿瘤、美容皮肤等功效,广泛用于甾体药物的合成、医学、食品、化妆品等领域。有关笋头资源应用的研究甚少,本文以废弃的毛竹笋头为对象,测定了毛竹笋头中常规营养成分和次生代谢产物含量,比较了两种毛竹笋头中β-谷甾醇的检测方法,研究了笋头中植物甾醇——,β-谷甾醇的提取分离方法,同时优化了浸泡提取法提取和硅胶静态吸附β-谷甾醇的相关参数,以获得高纯度的β-谷甾醇,为笋头资源的综合利用提供一定的理论和技术基础。本文测定了毛竹笋头中粗蛋白、粗脂肪、膳食纤维、灰分、可溶性糖等营养成分,每100g毛竹笋头干粉中含量分别为21.71g、5.98g、19.24g、2.98g、17.42g,结果表明,毛竹笋头具有高蛋白、高膳食纤维、低脂肪等特点。分析了毛竹笋头干粉中三种次生代谢产物:黄酮、三萜、植物甾醇的含量,分别为24.71mg/100g、85.65mg/100g、245.14mg/100g,植物甾醇含量较高。比较了Liebermann-Burchard比色法和HPLC法检测β-谷甾醇的特点,选用改进后的HPLC法检测毛竹笋头中β-谷甾醇,其保留时间约为7.252min,检测条件:岛津LC-10A型HPLC仪,PDA检测器,Inertsil ODS-SP、5μm×4.6mm×150mm型色谱柱,波长205nm,甲醇流动相,进样量10μL,流速1mL/min,测得其含量为230.25mg/100g。研究了溶剂浸泡提取法、超声提取法、微波提取法和超临界C02萃取法提取β-谷甾醇的特点,结果表明,浸泡提取法具有安全、操作简便、适合工业化应用等优点。在此基础上,通过单因素试验、Box-Behnken中心组合设计及响应面(RSM)分析,优化得到浸泡提取法最佳工艺参数:乙醇浓度95%、提取时间20min、料液比1:15、提取温度55℃。以吸附率为评价指标,通过单因素试验,优化得到了静态硅胶吸附β-谷甾醇的最佳工艺:吸附时间2h、吸附温度30℃、上样浓度0.3mg/mL,乙酸乙酯:石油醚=1:10为洗脱剂,动态分离后β-谷甾醇纯度为80.58%,干法上样硅胶柱再次分离后纯度提高到90.86%,可作为合成甾体药物的“精制甾醇”原料。同时,对分离后的高纯度β-谷甾醇进行了定性和表征,研究表明,HPLC、GC-MS、红外光谱是对其分析和结构表征的有效手段,图谱清晰,杂峰较少。
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