【摘 要】
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研究背景巨噬细胞集落刺激因子（Macrophage colony-stimulating factor,M-CSF）是免疫系统中一类具有关键调节作用的炎症因子,可以启动和增强巨噬细胞的杀伤作用,刺激胞饮。既往国内外研究结果表明,M-CSF不仅能够协助维持人体正常生理活动的稳定状态,同时也被证实在多种类型肿瘤,如肾癌、膀胱癌等病理组织中存在着M-CSF及其受体M-CSFR的高表达现象。在M-CSF的
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研究背景巨噬细胞集落刺激因子（Macrophage colony-stimulating factor,M-CSF）是免疫系统中一类具有关键调节作用的炎症因子,可以启动和增强巨噬细胞的杀伤作用,刺激胞饮。既往国内外研究结果表明,M-CSF不仅能够协助维持人体正常生理活动的稳定状态,同时也被证实在多种类型肿瘤,如肾癌、膀胱癌等病理组织中存在着M-CSF及其受体M-CSFR的高表达现象。在M-CSF的募集作用下,肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages,TAMs）在微环境内大量浸润,并进一步被极化成为M2亚型。活化的免疫细胞通过介导一系列炎性分子的合成和释放,促进癌细胞的生长和侵袭。目的目前针对卵巢癌局部微环境中M-CSF高表达的形成机制,以及其在调控巨噬细胞聚集和极化过程中的作用,鲜见研究和报道。本文通过体外细胞学研究和体内组织病理学分析,系统探究卵巢癌组织内的巨噬细胞在M-CSF诱导下产生极化和聚集现象的机制,进一步探讨M-CSF对于肿瘤细胞侵袭、转移的调控作用。方法模拟机体内环境构建A2780、SKOV3人卵巢癌细胞与单核巨噬细胞间接共培养体系。利用酶联免疫吸附实验和实时荧光定量PCR反应（Real-time quantitative PCR,q RT-PCR）对培养物上清中M-CSF的浓度及转录水平进行监测;流式细胞术对诱导生成的M2型巨噬细胞进行特异性表型鉴定;细胞迁移实验分别比较共培养后的培养基对A2780及SKOV3细胞趋化迁移的影响;免疫组织化学技术对52例卵巢癌病理组织切片和18例卵巢良性肿瘤组织切片中M-CSF、CD68、CD163和E-钙粘蛋白（E-Cadherin,E-Cad）进行染色鉴定。系统分析M-CSF在体内和体外各种状况下的表达情况及其与患者临床病理特征间的关联性。结果与A2780、SKOV3人卵巢癌细胞单独培养组相比,间接共培养体系中M-CSF的表达水平升高,差异具有统计学意义（P＜0.01）。利用q RT-PCR法进一步验证结论,证实升高的M-CSF来源于共培养条件下卵巢癌细胞的合成和释放（P＜0.05）。流式细胞术分析结果显示,共培养微环境可诱导THP-1来源巨噬细胞向CD68、CD163阳性M2亚型转化（P＜0.01）。Transwell实验分析表明,共培养后的A2780、SKOV3细胞迁移活性明显提高（P＜0.01）。卵巢癌组织中M-CSF、CD68和CD163表达强度高于良性肿瘤（P＜0.01）,而E-cad染色评分则低于对照组（P＜0.01）。单因素分析结果显示,M-CSF的表达水平与临床肿瘤分期、分化以及是否存在淋巴结转移间均具有统计学关系（P均＜0.05）;M-CSF染色评分与CD68+、CD163+细胞数呈显著正相关性（P均＜0.001）,与E-cad阳性表达呈负相关性（P＜0.001）。结论卵巢癌来源的M-CSF募集巨噬细胞在肿瘤组织中聚集,并诱导其向M2亚型极化,后者则进一步推动癌细胞的浸润和迁移进程;提示M-CSF在卵巢癌免疫辅助治疗中具有潜在的应用价值。
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