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目的对比分析两种不同方法检测K-ras、B-raf基因突变的应用价值；探讨结直肠癌K-ras和B-raf基因突变与临床及病理的相关关系；探讨K-ras和B-raf基因突变与结直肠癌预后的相关关系。方法收集360例结直肠癌标本，经4%中性甲醛固定、石蜡包埋组织后切片、刮取富集肿瘤细胞后提取DNA，应用即时定量PCR-Sanger测序与Taqman探针两种方法检测分析K-ras、B-raf基因的突变阳性率、突变类型及其与临床病理特征和生存时间的相关性等。360例中的16例由于在实验中结果不符合要求，所以最终具有详细临床随访资料且符合实验要求的病例数为344例。结果即时定量PCR-Sanger测序与Taqman探针法检出K-ras基因突变率分别为39.8%（137/344）和38.7%（133/344），检出B-raf基因突变阳性率分别为4.7%（16/344）和4.1%（14/344），两种方法无显著性差异（P＞0.05）。K-ras基因突变阳性率女性高于男性；B-raf基因突变阳性率结肠高于直肠，Ⅲ-Ⅳ期高于Ⅰ-Ⅱ期，印戒细胞癌高于粘液癌，非特殊类型腺癌最低，Ⅲ级高于Ⅱ级，差异均有统计学意义（P＜0.05）。两种方法总符合率为98.8%（Kappa值0.976）。B-raf基因突变型与K-ras突变型的生存时间差异有统计学意义（P=0.039），B-raf基因突变型与B-raf、K-ras基因均为野生型的生存时间差异似有统计学意义（P=0.058）。结论（1）本研究组认为，与Sanger测序法相比，Taqman探针法具有操作简便、耗时短、效率高、重复性好、费用低以及不需特别仪器设备等优点，具有更高的临床应用价值；（2）本研究组认为，结直肠癌中K-ras基因突变率与性别具有相关性，而B-raf基因突变率与原发部位、临床分期、组织学类型及组织学分级具有相关性；(3)本研究组认为，B-raf基因突变是结直肠癌患者的独立预后因素。