盐生海芦笋真菌分离鉴定与次级代谢产物研究

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嗜盐菌由于生活在高盐环境中,在长期进化过程中形成独特的代谢机制,能够产生结构新颖的次级代谢产物,在生物环保、食品、制药、发酵工业、农业生产等方面具有潜在的应用价值。本研究对分离自江苏盐城市响水县陈家港盐碱地野生海芦笋的四株嗜盐内生真菌Salicorn-3、5、8和19进行分类鉴定,提取基因组DNA后分别对18S rDNA知ITS1-5.8S-ITS4 rDNA区域进行PCR(Polymerase chain reaction)扩增,基因测序并进行同源性分析,构建进化树并进行系统发育分析,结合形态学观察,将该四株菌分别鉴定为甜菜蛇眼茎点菌(Phoma betae)、镰刀菌属(Fusarium sp.)、赤霉属(Gibberella avenacea)和小克银汉霉属(Cunninghamella sp.)以DPPH自由基清除率为抗氧化活性指标,采用Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和响应曲面法对菌株Salicorn-19的发酵条件进行优化,最大限度地提高其抗氧化活性。优化后的最佳培养基配方为:酵母膏1.6%,蛋白胨1.7%,土豆30%,麦芽糖3%,甘露醇3%,葡萄糖0.5%,味精1.0%,氯化钠1%,pH为7;采用此培养基所得发酵产物对2,2-二苯基-1-苦肼基(DPPH)自由基的最大清除率为78.25%,比优化前(清除率66.55%)有显著提高。对真菌Salicorn-19的发酵产物进行分离纯化与结构表征,该菌经静置发酵30L后,用环己烷提取发酵产物,并用硅胶柱层析分离得到3个单体化合物,化合物经核磁共振(NMR)和质谱(MS)解析为油酸、亚油酸和1,2油酸双甘油酯。
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