【摘 要】
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本文对476个功能不全的基因，采用生物信息学初选、酵母双杂交筛选和免疫共沉淀验证的方式进行初步功能研究。 文章采用的酵母双杂交系统库质粒基因是由500个重要的已知全长
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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本文对476个功能不全的基因，采用生物信息学初选、酵母双杂交筛选和免疫共沉淀验证的方式进行初步功能研究。
文章采用的酵母双杂交系统库质粒基因是由500个重要的已知全长基因组成，提高了酵母双杂交的效率和准确度。本文在酵母双杂交自激活实验中发现，7＃(AF525416.1)基因自激活为阳性。其余的基因再单独与含500已知基因组成的小库杂交，经过筛选，本文得到了5对蛋白结合的阳性结果。针对这5对阳性结果，本文将这些阳性基因克隆到哺乳动物细胞表达载体中，进行免疫共沉淀实验，在哺乳动物细胞中确认他们的相互作用。实验结果是11＃(Hs.188881)基因和两个蛋白PLAGL1、ZMYND11分别的免疫共沉淀实验都是阳性。进一步，本文将11＃(Hs.188881)基因截成1-154aa的11D1(D243C)和155-398aa的11D2(D243C)两段，分别克隆至哺乳动物细胞表达载体中，分别与PLAGL1和ZMYND11进行的免疫共沉淀实验发现，11D1(D243C)与PLAGL1存在相互作用，而11D2(D154N)与ZMYND11存在相互作用。根据PLAGL1和ZMYND11提供的功能提示：11＃(Hs.188881)基因可能与肿瘤、增殖、转录激活有关。本文为此进行了MTT、细胞凋亡等相关的功能实验，目前实验正在进行中。
本文从476个基因序列中，经过生物信息学初选，挑出13个基因并与500已知基因的小库进行酵母双杂交筛选，得到5对阳性结果；最后经过免疫共沉淀的验证，发现11＃(Hs.188881)的11D1片断与PLAGL1(pleiomorphicadenomagene-like1，多形性腺瘤样基因1)基因结合，11＃(Hs.188881)的11D2片断与ZMYND11(zincfinger,MYNDdomaincontaining11，含锌指和MYND结构域蛋白11)结合。这些研究结果为进一步揭示新基因11＃(Hs.188881)的功能，提示了方向、奠定了基础。
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