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赭曲霉毒素是真菌毒素的一种，由青霉属（Penicillium）和曲霉属（Aspergillus）的某些菌株产生的二级代谢产物。它包含有七种结构类似物，其中以赭曲霉毒素A（Ochratoxin A，OTA）的毒性最大、分布最广、产毒量最高、污染最严重。OTA具有强烈的免疫毒性、神经毒性、肾毒性和肝毒性，并且还有致癌、致畸和致突变作用，且OTA很难在人体和动物体内代谢，半衰期长，易在组织和血液中蓄积，因此OTA与人类健康的关系最密切，所以实现对OTA的快速、准确、简便的检测意义重大。免疫学分析法以敏感度更高，检出限更低，检测速度更快的独特优势在OTA定量、定性检测中广泛应用。但是当前的免疫学检测方法都是采用标记毒素纯品或偶联毒素到大分子蛋白作为竞争抗原基础上的含毒素检测体系，存在毒素标品昂贵、对检验操作人员的健康危害很大等缺陷，限制了它的应用和推广。近年来，利用噬菌体随机肽库展示技术得到的模拟表位肽替代毒素作为抗原，建立的无毒检测体系推动了OTA无毒免疫学快速检测的发展，解决了OTA毒性大、操作不方便等问题。本研究利用筛选噬菌体随机七肽库得到OTA的模拟表位，并以含有模拟表位序列的噬菌体粒子替代赭曲霉毒素A建立OTA的无毒免疫学检测方法。1．赭曲霉毒素A模拟表位的亲和淘选以纯化后的抗赭曲霉毒素A单克隆抗体为靶分子，亲和淘选融合表达在丝状M13噬菌体次要衣壳蛋白上的随机七肽库。经过四轮的亲和淘选，随着洗涤液中吐温-20含量的增加和靶分子浓度的逐渐降低，噬菌体的洗脱量从第一轮的7.3×105pfu/mL增加到第四轮的7.8×109pfu/mL，回收率从第一轮的7.3×10-4%增加到7.8%，因此可以得到能够跟靶分子结合的噬菌体粒子得到了有效的富集，为以后试验的顺利开展奠定了良好的基础。2．赭曲霉毒素A模拟表位的免疫学鉴定通过间接Phage-ELISA鉴定从第四轮淘选洗脱液测定滴度的板子上挑选的52株噬菌斑克隆，得到52株克隆都为阳性噬菌体，阳性率达到100%。再挑选其中的22株克隆进行进一步的间接竞争ELISA检测，得到22株阳性噬菌体克隆与抗OTA单克隆抗体的结合都能够被OTA标品所阻断，且敏感性较高，IC50均在8ng/mL以下，特异性试验结果也表明22株噬菌体只能够与抗OTA单克隆抗体，与其他的无关单抗没有结合。通过分析噬菌体载体插入的多肽序列分析，可以得到多肽的主要共有序列为MPLWXDL（X为任意氨基酸）。3．赭曲霉毒素A无毒ELISA检测方法的建立在成功筛选得到带有OTA的模拟表位序列的阳性噬菌体的基础上，采用间接竞争ELISA建立了OTA检测的ELISA方法。经过各种方法的优化，标准曲线线性回归很好， R2=0.9927，结果的重复性高，线性检测范围在2001400pg/mL，IC50为974.67pg/mL，检测限为201.33pg/mL，平均回收率在85%以上。