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研究背景和目的动脉粥样硬化是严重危害人类健康的一种慢性血管病变。一氧化氮介导的内皮依赖性血管舒张反应降低是动脉粥样硬化的一个早期标志。大量研究表明，内源性一氧化氮合酶(NOS)抑制物—非对称性二甲基精氨酸(ADMA)可能是导致血管内皮功能不全的重要物质。而内皮细胞中ADMA的主要代谢酶2型二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH2)表达和活性的降低与内源性ADMA升高密切相关。但目前尚无直接增加DDAH2表达和活性的药物。随着分子生物学及基因工程技术的飞速发展，基因治疗成为防治动脉粥样硬化的一条颇有希望的新途径。已有学者成功地将重组含内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、超氧化物歧化酶(SOD)基因腺病毒转染到动脉粥样硬化的动物血管，但并不能完全改善内皮依赖性血管舒张功能。因此本课题拟构建重组DDAH2腺病毒载体，将其导入高脂饲养致动脉粥样硬化兔的离体胸主动脉，探讨DDAH2过表达对动脉粥样硬化内皮功能不全的保护作用，为DDAH2基因治疗动脉粥样硬化性心血管疾病在临床上的推广应用提供可靠的实验依据。
方法①采用分子克隆技术构建hDDAH2重组穿梭载体和hDDAH2重组腺病毒载体，并在293细胞内包装、鉴定、扩增，纯化后获得高滴度的病毒悬液；②用高脂、高胆固醇饲养家兔12w，制备动脉粥样硬化动物模型，并经血脂测定、离体胸主动脉环内皮依赖性血管舒张功能检测和病理切片鉴定模型制备成功；③用重组hDDAH2腺病毒(1.5×1010virus/ml)体外转染高脂血症动物的胸主动脉环和正常动物的胸主动脉环，并经RT-PCR证明转染血管DDAH2表达增高，然后用离体血管环法检测DDAH2过表达对动脉粥样硬化血管内皮依赖性舒张功能损害的影响。
结论①本研究在国内外首次成功构建hDDAH2重组腺病毒载体，并证明腺病毒介导的hDDAH2基因能在血管壁中有效表达并具有生物学活性；②首次将hDDAH2重组腺病毒导入动脉粥样硬化家兔的离体血管，并能上调血管组织中DDAH2的表达和活性，逆转血管的内皮依赖性舒张功能不全；③本研究进一步证实了DDAH2表达和活性的降低是动脉粥样硬化时内源性ADMA升高和内皮功能不全的关键原因，为探讨动脉粥样硬化防治新途径奠定了重要的理论和实验基础。