论文部分内容阅读
目的:了解我国健康献血员隐匿性乙肝病毒感染者的流行率。探讨国内血站对献血员乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)筛查的安全性和可靠性。进一步改进献血员HBV筛查方法,减少HBV的漏检率;分析隐匿性乙肝感染者病毒S区,探讨引起隐匿性感染的原因。方法:1.收集经中心血站依据国家卫生部制定的血库安全的要求双筛HBsAg阴性、抗-HCV阴性、抗-HIV阴性、梅毒螺旋体抗体阴性、谷丙转氨酶(ALT<40IU/m1)阴性的合格献血员血浆2~3ml。-20℃保存;2.雅培Architect 12000电化学发光仪检测(?)HBsAg定量;Nested-PCR扩增乙肝病毒S区、C区、X区;3.Nested-PCR扩增隐匿性乙肝病毒感染者病毒PreS-S区,PCR产物直接测序并与标准病毒序列对比分析病毒株变异。结果:1.经雅培Architect 12000复检健康献血员中HBsAg阳性率为6.5%(64/983);扩增病毒S、C、X区,60.9%(39/64)至少两个区扩增阳性;健康献血员隐匿性HBV感染率为4.0%(39/983)。2.漏检的样本HBsAg滴度定量,中位数为0.17IU/ml (0.05-1.14 IU/ml); HBsAg阳性的标本60.9%(39/64)病毒扩增阳性,9.1%(25/64)病毒扩增阴性;HBsAg定量:阳性组中位数为0.15IU/ml (0.05-0.96IU/ml),阴性组中位数为0.18IU/ml (0.05-1.14IU/ml),病毒扩增阳性组与阴性组之间HBsAg定量、性别比例和转氨酶水平均无统计学意义。3.隐匿性感染者病毒载量均很低,约50~1000拷贝/ml;病毒PreS-S区段扩增阳性率35.9%(14/39);其中60.9%(39/64)至少两个区扩增阳性,29.6%(19/64)S区扩增阳性,64.1%(41/64)C区扩增阳性,65.6%(42/64)X区扩增阳性。35.9%(14/39)扩增出病毒PreS-S区段;4.测序结果峰图均一,未见混合感染。将S基因翻译成氨基酸后,与GenBank中各种基因型标准株的S区蛋白对比,并没有发现常见的已有文献证实可导致HBsAg阴性或分泌量降低的“a”决定簇变异。可见少数可能与HBsAg阴性相关的S区氨基酸位点突变:S45D, N68D, Q129R, F134N, V180S, V190I。结论:目前经血站常规检测HBsAg为阴性的合格血液,用敏感性更高的试剂仍能检测出HBsAg及HBV DNA。临床用血存在导致乙肝感染的风险。HBsAg分泌量处于判断界限附近时,即使是较为精确的电化学发光法检测技术,对于样本病毒阳性和阴性也难于作出判定。造成OBI的主要原因可能由于HBV低水平复制,检测试剂的灵敏度不够;病毒变异导致HBsAg的检测失败。