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目的:研究肾透明细胞癌(ccRCC)患者血循环microRNA的表达,初步建立肾透明细胞癌特征性的循环microRNA表达谱。方法:实验组共收集2008年8月到2009年6月期间肾透明细胞癌20例。其中14例接受根治性肾切除术,5例接受保留肾单位肾部分切除术,1例行肾穿刺活检。所有患者均经病理检查证实为肾透明细胞癌。AJCC肾癌临床分期:Ⅰ期8例,Ⅱ期3例,Ⅲ期5例,Ⅳ期4例。对照组20例为门诊体检健康人群。所有对照组均排除了肾脏疾病和其他部位肿瘤。实验组和对照组均于清晨空腹抽血,在无菌条件下操作,离心吸取血浆,再放入-80℃冰箱保存。挑选实验组和对照组血浆样本各8例,将每组的8例样本等体积混合,取混合后每组血浆2ml,用mirVana PARIS试剂盒分别抽提实验组和对照组的总RNA。测定浓度后使用TaqMan MicroRNA低密度芯片分别检测实验组和对照组的microRNA谱。使用SDS 2.3软件分析TLDA芯片数据;采用SPSS15.0软件进一步统计分析。对比分析两者之间microRNA表达的差异。结果:在肾透明细胞癌组和对照组的血浆中共检测到83种microRNA分子。其中ccRCC组73种表达阳性,对照组55种表达阳性。根据判断标准,我们找到48种在ccRCC组中表达显著上调的microRNA,其中有24种microRNA为肾透明细胞癌组特异性表达,24种表达明显上调。12种microRNA在肾透明细胞癌组中表达下调,其中10种为无表达,2种为表达明显下调。结论:[1]肾透明细胞癌患者血循环microRNA较正常人群有特征性改变。[2]肾透明细胞癌患者血microRNA改变以表达上调为主,这些microRNA改变可以用来区分肾透明细胞癌和正常人群,初步建立了肾透明细胞癌的循环microRNA表达谱。目的:验证miR-21,miR-142-5p和miR-34a在肾透明细胞癌患者血浆中的表达增加,分析其增加的程度与临床分期之间的关系。方法:实验对象同第一部分,包含全部实验组和对照组各20例。我们利用芯片结果结合相关文献筛选出miR-21, miR-142-5p, miR-34a三个microRNA分子。分别抽提实验组和对照组血浆总RNA,通过northern-blot和qRT-PCR对其进行检测。同时分别提取20例不同分期肾癌患者及正常对照血浆的总RNA,检测其miR-21,miR-142-5p和miR-34a在血浆中的表达程度,并分析这三种miRNA表达增加的程度与肾透明细胞癌临床分期之间的关系。结果:Northern-blot结果显示miR-21,miR-142-5p和miR-34a在肾癌患者血浆中表达明显上调。qRT-PCR验证发现,miR-21,miR-142-5p和miR-34a的溶解曲线很好,无非特异性峰。同时结果显示miR-21,miR-142-5p和miR-34a在肾癌患者血浆中表达明显上调,而在正常血浆中表达极低,与芯片结果一致。进一步的对比qRT-PCR检测显示miR-21和miR-142-5p表达的增加与肾透明细胞癌临床分期相关,而miR-34a的表达增加程度与临床分期无明显相关。结论:[1]循环miR-21和miR-142-5p在肾透明细胞癌患者表达增加,其增加的程度与临床分期可能相关。[2]循环miR-34a在肾透明细胞癌患者表达增加,其增加的程度与临床分期可能不相关。[3]循环miR-21,miR-142-5p和miR-34a可用于肾透明细胞癌的血清学诊断标志物。