论文部分内容阅读
[目的]观察大鼠一侧运动感觉皮层局灶性梗死后,梗死对侧大脑运动皮层内神经生长相关蛋白-43的表达(growth-associsted protein, GAP-43)以及梗死对侧皮质脊髓束(corticospinal tract, CST)的增殖及芽生,并分析梗死对侧大脑的神经重塑与神经运动功能恢复的关系,从而探讨脑梗死后对侧大脑锥体系统神经重塑在大鼠神经功能重建过程中的意义。[方法]采用双肾双夹法制备易卒中型肾血管性高血压大鼠(stroke-prone renovascular hypertensive rats, RHRSP)模型,术后每周监测血压1次。术后12周选取血压峰值维持在180mmHg以上、无白发性脑卒中、体重在300-450g之间的大鼠通过电凝法行右侧大脑中动脉皮层支闭塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)术。成功制备MCAO大鼠后,随机选取2只进行术后24h TTC染色,观察梗死灶部位。另选取38只分为A、B两个组。A组大鼠32只,按术后3d、7d、14d、28d时间点处死分别进行组织学(16只)及蛋白定量研究(16只)。即采用尼式染色观察梗死灶微观结构;免疫荧光染色法观察梗死对侧大脑运动皮层GAP-43的表达及分布部位;免役印迹法进行GAP-43蛋白表达定量。B组大鼠6只,术前1d及术后3d、7d、14d、28d、56d进行运动功能评分,并于术后42d接受左侧运动皮层生物素葡聚糖胺(biotinylated dextran amine, BDA)注射标记。术后56d处死采用免疫组化自由漂片法进行BDA染色观察颈髓平面梗死对侧CST芽生纤维的分布;免疫荧光双标法观察灰质前角内BDA与GAP-43共定位数量。另随机选取相同条件的RHRSP14只,仅暴露右侧大脑中动脉,但不凝闭动脉,分别作为上述A、B组的假手术组。[结果]①双肾双夹术后大鼠于术后1周血压明显升高,后逐渐上升,12周后血压基本稳定。②TTC及尼式染色显示梗死灶仅位于右侧大脑皮层,波及感觉运动区域。③与假手术组比较,MCAO组梗死对侧大脑运动皮层第V层内GAP-43阳性细胞于术后3d明显增多,并持续至术后14d,差异具有统计学意义(F=21.165,P<0.05);第Ⅱ/Ⅲ层内GAP-43阳性细胞于术后3d也明显增多,持续至术后7d,差异具有统计学意义(F=20.520,P<0.05),而GAP-43阳性细胞于术后7d较术后3d增多明显(P<0.05);免役印迹法证实,MCAO组梗死对侧大脑运动皮层内GAP-43蛋白表达水平于术后3d及7d均上调(F=5.713,P<0.05)。④与假手术组比较,脑梗死后期,MCAO组梗死对侧CST发出并越过颈髓中线、到达梗死灶支配侧颈髓灰质的BDA阳性纤维明显增加(11.90×104±1.46×10-4vs3.77×10.4±O.73×10-4,t=13.30,P<0.05),且分布范围广泛。高倍镜下可观察到BDA阳性纤维出现结节样膨大的突触样结构、并同时表达GAP-43。⑤Pearson相关分析显示,MCAO组大鼠运动功能恢复的程度,与梗死对侧CST芽生纤维数量呈正相关(r=0.87,P<0.05)。[结论]①RHRSP可作为研究脑梗死后脑组织病理生理改变的实验模型。②梗死后对侧大脑椎体系统在运动皮质内及脊髓水平均会发生神经重塑。③梗死后对侧大脑椎体系的神经重塑可能参与了脑梗死后神经功能的修复。