背景：随着器官移植技术的发展，离体器官的保存也越来越受到重视，离体器官的保存质量直接影响移植后器官的成活率及其成活后的功能，器官保存技术是近几十年的研究热点之一。 研究证明离体器官损伤有多种机制参与，如氧自由基损伤、基因调控的细胞凋亡等。有研究证明在器官保存液中加入氧自由基清除剂或抑制氧自由基生成的物质，或明显提高离体器官的存活时间，提高移植成功率，降低缺血再灌注损伤。 FK506是一种从霉菌中分离的大环内脂类抗生素，也是一种新合成的高效器官移植免疫剂。据研究报道，FK506可增强组织低温保存再灌注的血流，增加组织ATP含量，可减少再灌注组织中的氧自由基含量，减低细胞因子和释放和中性粒细胞的浸润能力，抑制TNF-α和IL-6的产生，从而减轻组织损伤。也有研究证明利用FK506预处理移植物，可明显降低移植物凋亡率，保护组织细胞线粒体，其机理仍在研究中。 角膜移植手术是目前最常见，成功率最高的器官移植手术，但免疫排斥反应依就是角膜移植失败的主要原因。临床上目前采用的皮质类固醇，环孢霉素A、丝裂霉素C等免疫抑制剂等，可以有效地防治免疫排斥反应。FK506目前已广泛用于各种器官移植及各类自身免疫性疾病的治疗，在抑制角膜移植免疫排斥反应方面有广泛的应用。近年研究发现，FK506在离体器官的保存方面也有重要的保护作用，可以明显降低离体器官细胞凋亡，延长离体器官保存时间，但FK506在离体角膜的保存的保护作用及其机制国内尚未见报道。 BCL-2基因是目前最受关注的并被确认的的调亡抵制基因，其基因产物通过抵抗线粒体释放促凋亡蛋白、维持细胞内钙离子的稳定、对抗脂质过氧化反应及抑制富含胱氨酸蛋白酶的激活等作用抑制细胞的凋亡。BCL-2富含于线粒体膜上，具有维护线粒体膜的完整性及生理通透性的重要作用，对细胞凋亡有明显的抑制作用。@ 本研究对FK506对离体角膜的保护作用及其机制进行探索，并通过BCL-2蛋白的表达情况对FK506对离体角膜保护的机理进行研究。 目的：探讨FK506在中期角膜保存过程中对角膜细胞形态的影响，以减少角膜保存过程中保存角膜细胞的价值，为改良角膜保存液，延长离体角膜保存时间提供实验室依据。 研究以免疫组织化学染色法观察BCL-2蛋白在离体角膜组织的表达，研究FK506对离体角膜保护的机理。 方法：收集质量相近身体健康的新西兰大白兔24只，耳缘静脉栓塞致死，完整取下眼球，每只兔的右眼做为试验组共24只置于4℃冰箱保存的，由山东省眼科研究所生产的角膜保存液中，每只兔的左眼共24只做为对照组置于同样的、同时生产的角膜保存液中，实验组中保存液含有0.3mg/L浓度的FK506。 分别于4、6、8天每组随机取4只眼球并取带2mm巩膜环的角膜片，经30-34℃2h复温，固定切片，置预冷的10％福尔马林液中固定，石蜡包埋，行角膜切片，切片厚4μm, HE染色。观察细胞形态。 于4、6、8天每组随机抽取4只眼球并取带2mm巩膜环的角膜片分别行半定量RT-PCR法观察BCL-2 mRNA表达水平和S-P免疫组化法观察角膜细胞BCL-2蛋白的表达水平。BCL-2蛋白免疫组化以显微镜下胞浆染成棕黄色为阳性细胞：将染色分为4级：0=阴性染色、1=弱阳性染色、2：中度阳性染色、3=强阳性染色，将各组染色分级量化后进行统计学分析，各组BCL-2蛋白表达差异用单因素方差分析等统计学方法进行统计分析。 结果：HE染色试验组较对照组保存角膜水肿较轻，被褶较少透明度较高，角膜细胞形态和结构较好。 半定量RT-PCR法检测BCL-2 mRNA表达，4天试验组BCL-2mRNA表达与对照组无明显统计学差异．(P>0.05)；6天试验组、BCL-2 mRNA表达高于对照组的有统计学差异(P<0.05)；8天试验组BCL-2 mRNA表达高于对照组的有统计学差异(P<0.05)。 免疫组化测定角膜内皮细胞BCL-2蛋白的表达，BCL-2蛋白免疫组化以显微镜下胞浆染成棕黄色为阳性细胞，4天试验组BCL-2蛋白表达与对照组无明显统计学差异(P>0.05)；6天试验组BCL-2蛋白表达高于对照组的有显著统计学差异(P<0.01)：8天试验组BCL-2蛋白表达高于对照组的有显著统计学差异(P<0.01)。 结论：FK506不仅在角膜移植后有较强的抗免疫排斥反应的作用，对于离体角膜保存过程中，也有保护作用，能够延长离体角膜的保存时间，FK506保存的离体角膜细胞内BCL-2蛋白表达增强，可以抑制离体角膜的细胞凋亡。