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背景酒依赖是一种由多基因控制、遗传因素与环境因素相互作用的复杂疾病。目前有研究表明表观遗传修饰参与了酒精使用障碍的病理过程,其中5-HT3受体参与酒依赖的神经生物学过程。有文献报道了HTR3A基因参与酒精渴求、酒精中毒、成瘾。目的1、通过分析酒依赖病例组HTR3A基因组蛋白H3K9乙酰化和基因表达的相对变化水平以及两者之间的关系,探讨HTR3A基因表观修饰在酒依赖发病机制中的作用。2、通过分析酒依赖病例组酒精渴求程度、严重程度与HTR3A基因启动子区组蛋白H3K9乙酰化和基因表达水平之间的关系,探讨酒依赖临床特征与HTR3A基因表观修饰之间的联系。方法1、以美国诊断与统计手册(DSM-IV)为诊断标准,收集酒依赖病例组,并按照与病例组年龄、文化程度、地域相匹配的原则招募正常对照组,用酒精使用障碍筛查量表(AUDIT)评估两组酒精使用严重程度,用强制性饮酒问卷(OCDS)评估酒依赖病例组酒精的渴求程度。2、通过染色体免疫共沉淀法(ChIP)得到酒依赖病例组和正常对照组免疫共沉淀下来的DNA片段,用荧光定量PCR检测DNA片段中HTR3A和GAPDH基因启动子区组蛋白H3K9乙酰化的含量。用2-△△cT法计算酒依赖病例组与正常对照组的相对变化值,用两样本t检验比较两组组蛋白H3K9乙酰化的差异。3、通过反转录荧光定量PCR方法检测酒依赖病例组和正常对照组HTR3A基因表达水平。用Trizol法提取总RNA并逆转录成cDNA,然后采用荧光定量PCR分别检测两组HTR3A和管家基因GAPDH mRNA的表达水平。用2-△△ACT法以GAPDH为内参将两组HTR3A mRNA相对表达量标准化,用两样本t检验比较两组之间的表达差异。4、采用Pearson相关分析法分析酒依赖病例组HTR3A基因启动子区组蛋白H3K9乙酰化水平与HTR3A基因表达水平的关系,分析酒依赖病例组酒精渴求程度、严重程度与HTR3A基因启动子区组蛋白H3K9乙酰化和基因表达水平之间的关系。结果1、本课题收集到病例组50例,正常对照组36例,均为男性。酒依赖病例组年龄(41.18±1.34)岁,正常对照组年龄(41.40±1.70)岁,两组年龄差异无统计学意义(t=0.363,P=0.718)。酒依赖病例组OCDS量表总分22.36±0.77,OCDS-os评分9.30±0.37, OCDS-cs评分13.10±0.44,AUDIT测试得分19.06±0.81(数值大于或等于8为阳性)。2、酒依赖病例组(2.37±0.10,n=50)外周血HTR3A基因启动子区组蛋白H3K9乙酰化水平与正常对照组(1.00±0.00,n=36)相比明显升高(t=12.033,P=0.000)。管家基因GAPDH启动子区组蛋白H3K9乙酰化(1.06±0.03,n=50)水平差异无统计学意义(t=1.748,P=0.084)。3、酒依赖病例组(2.06±0.09,n=50)外周血HTR3A基因表达水平与正常对照组(1.00±0.00,n=36)相比明显升高(t=10.155,P=0.000)。4、酒依赖病例组外周血HTR3A基因启动子区组蛋H3K9乙酰化水平与HTR3A基因表达水平呈正相关(r=0.322,P=0.023)。5、酒依赖病例组酒精渴求程度量表OCDS总分、OCDS-os评分、OCDS-cs评分均与HTR3A基因启动子区组蛋白H3K9乙酰化无相关性(r=0.076,P=0.601；r=0.021,P=0.884；r=0.130,P=0.368)。酒依赖病例组酒精渴求程度量表OCDS总分、OCDS-os评分、OCDS-cs评分与HTR3A基因表达水平均呈正相关(r=0.309,P=0.029；r=0.290,P=0.041：r=0.314,P=0.029)。6、酒依赖病例组酒精严重程度量表AUDIT总分与HTR3A基因启动子区组蛋白乙酰化无相关性(r=0.277,P=0.052)。酒依赖病例组酒精严重程度量表AUDIT总分与HTR3A基因表达水平呈正相关(r=0.307,P=0.030)。结论1、HTR3A基因启动子区组蛋白H3K9乙酰化水平升高促进其基因表达可能是酒依赖的生物学机制之一。2、酒依赖患者HTR3A基因表达水平升高与酒精的渴求和严重程度有关。