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目的研究低分子硫酸软骨素的制备方法,并探讨其对软骨的修复作用。方法1、称取一定量分子质量在5万以上的硫酸软骨素(ChS),在一定温度和条件下分别用HC1、H2O2和硫酸软骨素裂解酶EAC对其进行降解,反应结束后用乙醇沉淀、脱水、干燥,产物用高效液相色谱仪测定分子量。2、建立新西兰大白兔膝关节软骨缺失模型,36只新西兰大白兔随机分成6组,分别为对照组[蒸馏水0.4g/(kg·d)]、模型组[蒸馏水0.4g/(kg·d)]、低分子量ChS低剂量组[低分子硫酸软骨素0.2g/(kg·d)]、低分子量ChS高剂量组[低分子硫酸软骨素0.4g/(kg·d)]、高分子量ChS低剂量组[高分子硫酸软骨素0.2g/(kg·d)]和高分子量ChS高剂量组[高分子硫酸软骨素0.4g/(kg·d)],每组6只,分别进行灌胃给药。记录各组实验用兔的体重、生存时间和生活状况,对关节软骨缺损部位修复情况和病理组织学切片进行观察。应用ELISA法检测兔关节液中IL-1β、TNF-β和TGF-β的水平,并采用全自动生化分析仪及其配套的试剂盒对兔血清中钙、磷含量进行测定。结果1、经高效液相色谱法测定,硫酸软骨素原料的分子量为55426。用HC1降解得到的ChS,分子量为3936,颜色从白色转变成红褐色,产物粘性较大,产率较低为48.71%；而用H202在酸性条件下和用硫酸软骨素裂解酶EAC降解所得到的硫酸软骨素,降解效果较好,分子量分别为4217和4565,其外观较好,产物为乳白色,其产率分别达到64.45%和91.6%。2、造模后伤口愈合情况较好,实验用兔生活状态和精神状态良好。造模后各组体重均有下降,但模型组与其余给予ChS组相比,体重下降明显。低分子ChS组,其软骨表面较为平整,凹陷基本已填充,较模型组与高分子ChS组效果明显。在HE染色状态下,损伤修复处均可见初期修复反应,并且给予低分子ChS组效果要优于高分子ChS组和模型组。3、低分子ChS和高分子ChS都能够减少关节液中炎性因子的含量和增加TGF-β的含量(P<0.05),且低分子ChS组与高分子ChS组相比,效果较好(P<0.05)。与模型组相比,给予ChS的组别,其血清中的钙磷含量也相对较少(P<0.05)。结论1、HC1、H2O2和硫酸软骨素裂解酶EAC都能有效地将分子量为5万以上的ChS降解为分子量在3500-5300范围内的低分子量产物。2、低分子ChS能够更好地促进伤口愈合和软骨修复,这可能是因为低分子ChS,分子量较小,机体易于吸收,生物利用度提高,从而使得伤口愈合和软骨修复的作用较为明显。3、高、低分子量的ChS都可以增加TGF-β的含量,降低IL-1β、TNF-α和血清中钙、磷的含量。且低分子ChS要优于高分子ChS。对于软骨修复,这可能是通过对上述因子的影响,从而产生积极的作用。