通过文献查阅,总结中医抗肝损伤常用治则治法,同时统计与肝损伤相关的临床及实验研究资料,总结抗肝损伤中医临床用药规律以及实验研究进展。同时在前期试验研究的基础上选择山茱萸为本实验的研究药物,以D-氨基半乳糖(D-GaIN)和αc肿瘤坏死因子(TNF-a)联合作用作为造成肝细胞L-02损伤的实验模型,探讨山茱萸对于损伤肝细胞的影响以及相关的分子机制。一、理论研究在中国知网数据库,以“肝损伤”、“肝病”、“保肝”为关键词进行搜索,‘总结中医抗肝损伤的治则治法；并将复方研究文献与单味药物研究文献分类整理,同时整理复方研究文献中所包含的单味中药,按照中药学教材分类方法将复方研究文献与实验研究文献所涉及相关药物进行分类统计,归纳分析治疗肝损伤疾病的临床用药规律以及实验研究进展。研究结果表明,肝损伤的病因多由外感湿热疫毒、饮食不节、药物应用不当,病机为肝失疏泄,脾失健运,湿热蕴结,气滞血瘀,而发为胁痛、黄疸、甚至臌胀、积聚,其病位主要在肝,关系脾、胃,久则及肾。中医治疗肝损伤疾病主要以疏肝、养肝、健脾、和胃等方法为治疗原则。抗肝损伤复方文献研究统计结果显示清热药、补虚药、活血化瘀药在肝损伤疾病的治疗中应用最为广泛：通过对药物归经的分析发现,抗肝损伤药物入肝经者最多,其次为入脾、胃经；实验研究文献统计结果显示,抗肝损伤药物主要集中在补益药、清热药、活血化瘀三类药物。山茱萸为临床常用补益肝肾药物,通过文献研究,总结了山茱萸的化学成分与药理作用,以及抗肝损伤的研究进展。二、实验研究提取并分离、制备山茱萸环烯醚萜苷(cornel iridoid glycoside, CIG);体外培养人源性肝细胞L-02, MTT法建立D-Ga1N/TNF-α L-02细胞损伤模型。实验设置空白组,模型组,环烯醚萜苷低浓度组(CIG低组),环烯醚萜苷中浓度组(CIG中组),环烯醚萜苷低高浓度组(CIG高组),药物作用结束后,用CCK-8 (Cell Count kit-8)法检测各组细胞活性；取培养细胞上清液,按照试剂盒说明书检测丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)活性；采用Hochest-33258染色法,观察各组细胞形态；收集各组细胞,用流式检测技术检查各组细胞的凋亡比率；通过检测各组细胞的总抗氧化能力(T-AOC)、以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量比较各组细胞的抗氧化能力；Western Blot检测各组L-02细胞p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3蛋白的表达,从抗氧化和抗内质网应激凋亡两个方面研究山茱萸环烯醚萜苷对D-Ga1N/TNF-α损伤L-02细胞的保护作用。实验结果证明：44pg/ml D-Ga1N联合100ng/ml TNF-α作用12h可造成L-02细胞损伤,对细胞活性的抑制率达到38%。CIG不同浓度均可以显著提高损伤细胞的活性,高、中、低浓度组与模型组比较,细胞的活性分别提高了21%、13%、8%。CIG不同浓度均可使损伤后细胞外的LDH含量显著降低,与模型组比较具有显著性差异(P<0.05),CIG高、中浓度可以显著减低损伤后细胞的MDA含量(P<0.05),低浓度可以降低MDA含量,但差异不显著；荧光染色结果显示,模型组细胞核破裂或固缩严重,细胞核内可见致密的蓝色荧光颗粒,CIG三个浓度组可以改善损伤细胞的形态,维持细胞膜的完整性,核膜破裂减轻；流式检测结果是,Control组细胞早期凋亡率与晚期凋亡率之和为0.59%,模型组细胞的总凋亡率为28.87%,两组比较具有显著性差异(P<0.05),CIG高、中、低浓度三组细胞凋亡率分别为11.09%、15.84%、22.20%,三组与模型组之前的差异,在统计学上具有意义(P<0.05)。CIG10-100μg/ml浓度,能显著升高损伤后细胞T-AOC、SOD以及GSH-Px活性,三组数据与模型组的差异均具有显著性意义(P<0.05)；荧光探针法检测细胞内Ca2+浓度,CIG高、中、低浓度组能够显著降低损伤后细胞内的Ca2+含量；Western Blot结果显示,CIG不同浓度组可以显著降低内质网应激相关蛋白p-PERK、ATF4、CHOP、p-eIF2α以及凋亡关联蛋白Caspase-3表达。结论：D-Ga1N和TNF-α联合可造成L-02损伤模型,山茱萸环烯醚萜苷对D-Ga1N/TNF-α造成的肝细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过增强细胞的抗氧化能力,降低细胞内Ca2+浓度,以及降低内质网应激激活的凋亡通路中相关蛋白的表达有关。