由半知菌亚门丝孢纲节菱孢属的暗孢节菱孢菌(Arthrinium phaeospermum(Corda)M.B.Elli)引起的撑×绿杂交竹梢枯病(Hybrid bamboo blight)是威胁杂交竹产业的重要病害之一,严重阻碍了撑×绿杂交竹的发展。目前,在林业生产上对该病的防治主要是采用化学农药,生物防治在该病害上运用较少。本研究从健康杂交竹枝、叶分离筛选出1株对杂交竹梢枯病菌具有良好拮抗效果的菌株,并对该菌株产生抗菌物质的发酵条件、分离纯化及其作用机理进行了研究,主要取得了以下研究结果:　　 1、采用稀释平板法从健康杂交竹枝、叶分离出56株细菌,经多次对峙培养和发酵上清液抑菌性测定筛选得到1株对暗孢节菱孢菌有较好拮抗作用的菌株YB15。通过形态观察,生理生化试验及16SrDNA的序列分析鉴定该菌株为Bacillus velezensis。　　 2、通过单因素和正交试验,对YB15菌株产生抗菌物质的发酵培养基进行优化,方差分析表明氮源,温度,pH值和接种量对该菌产生抗菌物质的影响较大,而碳源,无机盐和装液量则影响甚微。该菌产生抗菌物质的最适条件为:葡萄糖5g,酵母浸膏7.5g,蛋白胨7.5g,(NH4)2SO45g,NaCl5g,水1000mL,温度25℃,初始pH值6.5,接种量4％且装液量100mL于300mL三角瓶,发酵时间60h。优化后的培养条件使YBl5菌株产生抗菌物质的能力大大提高,抑菌率达到80％以上。　　 3、采用硫酸铵分级沉淀法发现,YB15菌株发酵上清液含有的抗菌物质可被50％饱和度的硫酸铵沉淀,该沉淀经过透析浓缩后即为粗提物。对该粗提物生物活性检测表明,该粗提物可能具有蛋白酶活性特征,而不具有几丁质酶和纤维素酶活性。将粗提物经过Sephadex G-50分子筛层析、High Q Sepharose Fast Flow强阴离子交换层析、Sephadex G-75分子筛层析后获得1个活性峰,SDS-PAGE电泳检测该峰为单一条带,分子量为31.0KDa。将该峰进一步用反相HPLC的方法进行纯度检验,经洗脱后得到3个峰,活性检测表明出峰时间为21min的峰3具有抑菌活性,并命名为抗菌蛋白BV-1。采用Edman降解法成功测定了该抗菌蛋白N端的9个氨基酸序列,即H2N-Gln-Val-Arg-Asp-Arg-Leu-Glu-Ser-Thr。经分析和比对,推断该抗菌蛋白为丝氨酸碱性蛋白酶。对该抗菌蛋白性质测定显示该抗菌蛋白对蛋白酶K和胰蛋白酶不敏感,耐热,不耐酸碱和紫外线,对有机溶剂敏感性存在差异。　　 4、抗菌蛋白对病原菌的抑制作用测定表明,该抗菌蛋白能抑制病原菌菌丝生长,使其出现变形扭曲,断裂,不规则卷曲,顶端膨大等畸态,对病原菌的MIC为0.2mg/mL,MBC为0.4mg/mL,有效抑菌中浓度EC50为0.084mg/mL。另外,该抗菌蛋白对病原菌的孢子萌发具有抑制作用,且浓度越大,抑制作用越强,即使勉强萌发的孢子,芽管也出现形状不规则的膨大,顶端缢缩,分支等畸状;还能在病原菌的生长过程中抑制其产生分子孢子,达到拮抗的效果。进一步对该抗菌蛋白抑菌机理的研究发现,该抗菌蛋白能破坏病原菌菌丝体细胞膜的通透性,增强病原菌细胞膜脂质过氧化,导致细胞膜受损,胞内物质外渗,破坏或抑制病原菌菌体内蛋白质的合成,影响菌体总蛋白含量,而且这些作用随着抗菌蛋白浓度的增大而增强。