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目的:研究生存蛋白(Survivin)和细胞周期蛋白E(Cyclin E)在初发性与复发性尖锐湿疣(condyloma acuminatum,CA)及正常包皮组织角质形成细胞中的表达水平,并就其差异性进行研究,并进一步探讨Survivin和Cyclin E在尖锐湿疣组织中的表达与尖锐湿疣发生发展、复发关系,及在尖锐湿疣临床治疗方面的应用前景。
方法:随机选择2007年8月至2007年10月四川省医学科学院·四川省人民医院皮肤病性病研究所皮肤性病科·门诊的初发性CA患者34例和复发性CA患者31例,另选10例健康成年男性包皮组织作正常对照。对所有标本进行普通HE染色以及Survivin和Cyclin E的免疫组化SP法染色。每个免疫组化染色流程均设有对照作为染色质量控制标准,阳性对照采用反复染色阳性的切片,空白对照采用PBS代替一抗。采用BH-2型OLYMPUS光学显微镜观察4个10×10倍镜视野下角质形成细胞Survivin和Cyclin E的分布和染色深浅,并按以下标准对染色深浅评分:无色为0分,浅黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分。再在相同光学参数下将上述视野用JVC彩色摄像机和朗珈Path TBS细胞学报告工作站摄取图片,应用Image-Pro Plus 5.0软件进行阳性细胞和细胞总数计数,阳性细胞表现为胞核(Cyclin E)、胞浆或胞核(Survivin)出现黄色或棕黄色颗粒状着色,并计算阳性细胞率(阳性细胞率=阳性细胞数/细胞总数),按照以下标准对阳性细胞率评分:阳性细胞率<25%为1分,25%~50%为2分,50%~75%为3分,>75%为4分。根据上述两个评分的积分对Survivin和Cyclin E的表达水平进行4等级半定量分析:积分≤2分为±(可疑阳性),3~4分为+(弱阳性),6~8分为++(中度阳性),9~12分为+++(强阳性)。将统计结果分为2组,以可疑阳性为1组,弱阳性~强阳性为1组。应用SPSS15.0统计软件包,采用完全随机设计两样本率比较的X2检验方法分析,并使用直线相关的分析法分析标本的Survivin和Cyclin E染色积分相关性。
结果:1.经t检验,初发CA组和复发CA组及对照组年龄、性别构成无统计学差异(P>0.05),三组组间具有可比性。2.所有CA病理组织标本HE染色下均可见乳头瘤样增生和凹空细胞。3.Suvivin在初发性与复发性CA患者标本角质形成细胞中表达水平比较无显著性差异(P>0.05),正常对照组标本角质形成细胞的表达水平明显低于初发性与复发性CA患者标本角质形成细胞表达水平(P<0.05)。4.Cyclin E在初发性与复发性CA患者标本角质形成细胞中表达水平相比较无显著性差异(P>0.05),正常对照组标本角质形成细胞的表达水平明显低于初发性与复发性CA患者标本角质形成细胞表达水平(P<0.05)。5.三组标本角质形成细胞Survivin染色积分与Cyclin E染色积分均无相关性(P>0.05)。
结论:1.本实验检测出Survivin在CA中的异常高表达,提示Suwivin蛋白引起的细胞凋亡抑制在CA的发生发展过程中起到重要的作用。2.本实验检测出Cyclin E在CA中异常高表达,Cyclin E可能参与了角质形成细胞和病毒的繁殖过程,在CA上皮增殖中发挥作用。3.Survivin和Cyclin E在初发性和复发性CA中表达水平无差异,表明它们的表达情况可能与CA复发无关。但本实验将CA分为初发组和复发组,并通过对CA中一些异常表达蛋白检测的角度来探讨CA复发的某些机制,为进一步探讨CA复发的研究提供一个新思路。4.Survivin和Cyclin E在CA中的异常表达将可能成为免疫治疗和基因治疗中的一个新靶点。5.Survivin和Cyclin E在三组标本角质形成细胞中表达水平无相关性,具体机制尚不明确。