干扰素(Interferon, IFN)是一类主要由脾脏细胞或肝脏细胞产生的分泌型多功能糖蛋白,是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤和增强免疫功能的细胞因子。由于具有抗病毒和免疫调节方面重要的生物活性,干扰素已成为近年来研究的热点。目前,人和哺乳动物的干扰素研究较多,而非哺乳动物的干扰素研究相对较少。虽然国内外相关研究证明体外原核表达的鸡重组干扰素(IFN- )和鸡重组γ干扰素(IFN-γ)具有良好的抗病毒活性;但鸡干扰素的研究仍局限于对单个干扰素的表达及活性研究,对鸡与γ干扰素联合抗病毒应用的研究未见报道。此外,鸡体内分泌的干扰素数量有限,很大程度上制约了干扰素作为抗病毒药物的广泛应用;因此,建立一种高效而又稳定的表达系统,并重点研究与γ干扰素的协同作用具有重要的意义。本研究利用分子生物学技术对鸡、γ干扰素进行了体外原核表达,并系统研究了鸡、γ干扰素联合应用下在体外和体内的抗病毒活性,具体分为以下两个部分:1、本研究根据GenBank上登录的鸡、γ干扰素基因序列设计了2对特异性引物,从上海普通三黄鸡脾脏中提取总RNA,建立了鸡、γ干扰素基因的套式PCR扩增方法。结果显示,扩增的鸡、γ干扰素目的基因片段分别为447bp与438bp。利用pET-30a构建鸡重组、γ干扰素的高效表达质粒,经酶切、测序鉴定后转化到BL21(DE3)中诱导表达,再用Ni-NTA层析柱纯化重组蛋白,获得了较高纯度的干扰素蛋白,为进一步研究其抗病毒活性提供了候选蛋白。2、利用BHK-21细胞,将纯化的鸡重组干扰素蛋白通过细胞病变抑制法检测其抗新城疫病毒活性。结果表明重组鸡干扰素和γ单独应用,均具有良好的抗病毒活性,并且将鸡干扰素和γ按125:1比例搭配应用,其抗新城疫病毒更好。通过干扰素作用感染新城疫病毒的鸡胚实验。结果显示,与病毒对照组相比,IFN-和IFN-γ及IFN-和γ联合组,HA滴度都有明显的降低;并且从鸡胚的平均死亡时间上,联合干扰素组对新城疫病毒的抑制作用更强于单个干扰素组的应用。这证明了鸡IFN-、IFN-γ及其联合干扰素对新城疫病毒的复制有明显的抑制作用。