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本论文系统研究了巯基乙酸稳定的CdTe量子点在抑癌基因转染的可视化示踪,以及在鼻咽癌相关生物标志物的免疫荧光检测中的应用,分别为肿瘤相关的生物学机制研究及肿瘤的早期临床诊断提供新的途径。
首先,在基于CdTe量子点构建抑癌基因转染载体的过程中,我们设计不同寡核苷酸序列,将其分别共价耦联于CdTe量子点表面,发现表面负电性寡核苷酸修饰可以有效介导表面仍为负电性的CdTe—寡核苷酸耦联物的细胞内吞,并且,所修饰寡核苷酸耦联物的长度及碱基序列不会影响CdTe—寡核苷酸耦联物的细胞内吞效率。此外,通过采用不同细胞内吞途径的特异性抑制剂对寡核苷酸介导的CdTe量子点的细胞内吞机理进行系统研究发现,CdTe—寡核苷酸耦联物通过脂筏依赖的巨胞饮实现细胞内吞,且所修饰寡核苷酸的长度及序列同样对CdTe量子点的细胞内吞途径无明显影响。
其次,在以上研究的基础上,我们将有效诱导肿瘤细胞凋亡的存活蛋白(survivin)反义寡核苷酸(ASON)共价耦联于CdTe量子点表面实现了survivinASON的有效细胞内吞。并通过荧光定量PCR及对所转染细胞的活性测定证明,CdTe-ASON可以特异性下调survivin mRNA表达水平并最终诱导肿瘤细胞凋亡。同时,通过CdTe量子点的荧光,我们成功监测了ASON随时间在细胞内的动态分布过程及其最终细胞内的定位。为survivin ASON的生物学功能及细胞内定位建立联系,并进一步为在细胞水平上对survivin ASON生物功能及其引发的生物学现象的研究提供新的依据。
最后,除将CdTe量子点应用于肿瘤相关的分子生物学机制研究之外,我们还对CdTe量子点在肿瘤早期诊断中的应用进行了初步的研究。我们将CdTe量子点表面修饰变性牛血清白蛋白(dBSA),所制备的CdTe@dBSA量子点的荧光效率及荧光稳定性较CdTe量子点本身均明显提高。进一步通过CdTe@dBSA与生物靶向分子的共价耦联,我们初步将其应用于鼻咽癌病人血清中抗EB病毒壳抗原的免疫球蛋白A抗体的免疫荧光检测中,为基于CdTe量子点构建的分子荧光探针在鼻咽癌临床早期诊断中的应用提供了新的途径。
综上,本课题研究证实,基于量子点可以有效为肿瘤相关生物学机制研究提供有效于段,同时可以为肿瘤早期临床诊断建立新的方法,并有望最终为新型肿瘤相关研究和诊断方法的建立提供有效策略。