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MicroRNA(miRNA)是一类广泛存在于真核生物中长度为19~25nt,对生物生长发育、细胞增殖、激素调节以及胁迫响应等过程发挥着重要作用的内源非编码小分子RNA。植物miR395通过调节其靶基因ATP硫酸化酶和BnSultr2;1的表达在硫酸盐同化和分配中起着重要的作用。同时,植物耐重金属胁迫与硫代谢有着密切的关系。其中最显著的是,植物在Cd胁迫下其根部硫吸收、同化以及与谷胱甘肽代谢相关的基因表达均被上调。
为了探索miR395调节植物对镉的耐性及保护功能,我们采用了20-120μM CdCl2连续处理miR395d过表达和野生型油菜七天。研究发现,miR395d过表达油菜的生物量、Cd的积累等要比野生型高。在40μM CdCl2处理下,miR395d过表达植株中硫代巴比妥酸反应产物(TBARS)含量比野生型低,叶绿素(Chlorophyll)、非蛋白巯基(NPT)和谷胱甘肽(GSH)的含量明显高于野生型,表明miR395d在植物耐重金属胁迫中起着关键作用。为了研究不同供硫水平对植物耐Cd的影响,我们给油菜施以不同硫浓度,发现油菜在缺硫条件下会加重Cd的毒害,而miR395d过表达植株中Cd的毒害程度相对较轻。miR395d过表达植株中的硫含量显著高于对照组,说明miR395在Cd胁迫下通过调节硫转运体及硫代谢酶活性来加强对SO42-的吸收和同化。为了证实上述结论,我们采用含有不同CdCl2(20-200 mg/kg)浓度的土壤分别处理上述株系油菜,发现生物量和硫含量的变化趋势和水培法基本一致。于此同时,我们还检测了转基因油菜中抗氧化酶如植物螯合肽合酶(BnPCS1)、血红素加氧酶(BnHO1)的转录活性。
结果表明Cd胁迫下miR395d过表达植株中这些酶基因表达活性均比野生型要高。这些结果说明miR395在保护植物抵御Cd毒性及Cd诱导的氧化胁迫中发挥着重要的功能。