一种新的基于细菌交配和Tn7转座酶的构建重组杆状病毒和腺病毒的方法

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重组杆状病毒系统(Recombinant Baculovirus System)是一种在昆虫细胞中表达重组蛋白的非常有用的工具,因为其的独有的特征而广受欢迎,包括容易折叠,转录后修饰,包装,表达量高等特点。而重组腺病毒系统(RecombinantAdenovirus System)是一种高效的基因传递和表达系统,被广泛运用于基因功能研究,癌症、遗传疾病的基因治疗及疫苗研究。随着人们对分子克隆技术的不断发展和提高,多种不同的方法被用来构建重组杆状病毒和腺病毒。目前已有多种商品化的腺病毒表达系统它们包括Adeno-Quest系统,hdeasy系统,Adeno-X系统,Gateway系统和bac-to-bac系统。 这些系统或者利用同源重组,或者利用直接体外连接,或者利用位点特异性重组,成功的将外源基因克隆到病毒基因组上,获得重组病毒。然而这些系统有自身的缺点,或者需要昂贵的稀有酶,或者需要特殊的重组酶,或者需要费时费力的多轮空斑纯化,或者有着潜在的载体自身易重组的缺点。 针对以上的不足,本论文希望构建一种高效并且稳定的构建重组杆状病毒和重组腺病毒的系统。本论文的主要目标:(1)利用新的LIC方法完成的基因到穿梭载体的入口克隆,实现高通量的构建重组穿梭质粒。(2)充分利用MAGIC系统,和Bac-to-Bac系统,继承两者的优点开发出一种基于细菌交配和Tn7转座的新的构建重组杆状病毒和重组腺病毒的系统。
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