毛细管电泳核酸在线富集新方法的研究

来源 :中国科学院沈阳应用生态研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ffgooo208w
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近年来,毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)作为一种高效、微量、高灵敏度及自动化的分离分析方法,已在医学、生物学等领域受到广泛关注,是分析带电生物大分子最有效、最广泛的技术之一。建立高灵敏度和高分离效率的分析方法是分离分析化学的基本目标。20世纪后期,一个备受关注的问题是如何提高检测灵敏度。目前主要的方法可分为三种:一是从仪器的角度考虑,如使用泡状检测池、Z型和多重反射毛细管,通过增加光程来提高灵敏度;二是从样品的角度考虑,对样品进行浓缩;三是从电泳的方法考虑,称为在线富集方法,其中包括添加剂的使用和电泳方法的改进。尽管这几种富集方法可以达到较好的富集效果。但是,大量的生物样品都含有无机盐,在分析时难以直接应用,如血液和尿液。通常需对样品进行稀释或渗析,而这些步骤繁琐且耗时。所以,高盐样品的CE在线富集研究已引起了分析工作者广泛的兴趣。目前,适于高盐样品的富集方法有瞬间等速电泳法、乙腈法、pH修饰法、动态pH联接法、胶束反应法和瞬间移动化学反应界面法等。其中,乙腈法、动态pH联接法和pH修饰法等高盐富集方法比较适于核酸的高盐富集,但这些方法的主要缺点就是操作比较繁琐或需要不同的添加剂。   本研究主要发现了两种毛细管电泳过程中核酸在线富集的新现象。在第一个研究中我们发现丙三醇对高盐核酸具有富集作用,核酸的富集效果约为10~30倍,并对不同核酸的分离有促进作用,同时对丙三醇的富集机理进行了探讨。另外,在试验过程中我们还发现了一种基于核酸浓度的自我富集现象,不同浓度的核酸在毛细管中的构象不同,导致了浓度依赖的自我堆积。为了进一步阐明该现象,我们利用Submicron Particle Size Analyzer作了类似的试验,证实了我们的推测。该现象的阐明,不仅对分析核酸的实践有一定的指导意义,而且使本文对核酸基本性质有了进一步的认识。利用毛细管电泳研究大分子构象,值得和需要进一步的探讨。
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