【摘 要】
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热带水果采后贮藏运输产业已成为海南果蔬产业链的重要组成部分,海南得天独厚的气候条件孕育了芒果、番木瓜、香蕉、火龙果、莲雾、荔枝、龙眼和杨桃等多种典型的热带水果,热带水果以其种类多样、风味独特、高营养等特点,深受消费者青睐。然而,海南常年高温高湿的环境为诸多病原菌侵染采后果实提供了有利条件,果实采后病害频发。长期使用化学杀菌剂控制果蔬采后病害使得农药残留、病原菌抗性和诸多食品安全问题日渐严重,化学防
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热带水果采后贮藏运输产业已成为海南果蔬产业链的重要组成部分,海南得天独厚的气候条件孕育了芒果、番木瓜、香蕉、火龙果、莲雾、荔枝、龙眼和杨桃等多种典型的热带水果,热带水果以其种类多样、风味独特、高营养等特点,深受消费者青睐。然而,海南常年高温高湿的环境为诸多病原菌侵染采后果实提供了有利条件,果实采后病害频发。长期使用化学杀菌剂控制果蔬采后病害使得农药残留、病原菌抗性和诸多食品安全问题日渐严重,化学防治已不再长久可行,绿色、环境友好的生物防治方法成为果蔬采后保鲜及病害控制更为理想的选择。本研究以海南多种热带水果为研究材料,从采后自然发病的果实上分离得到6株采后病原菌,并以此6株病原菌为指示菌,从莲雾果园土壤中分离得到了广谱生防菌株N-1,研究了其体外、体内生防效果,并对广谱拮抗机制进行了初步探讨。（1）采后果实病原菌的分离、筛选和鉴定:从采后自然发病的杨桃、龙眼、香蕉果实病斑（病健交界处）分离纯化获得6株病原菌,分别编号为L-B1、L-B2、XJ-B1、XJ-B2、A-B2和A-B3,通过形态学特征、科赫法则致病检验和分子生物学序列分析,将其依次鉴定为变红镰刀菌（Fusarium incarnatum）、可可毛色二孢菌（Lasiodiplodia theobromae）、白地霉（Geotrichum candidum）、砖红镰刀菌（Fusarium lateritium）、拟茎点霉（Phomopsis sp.）和菜豆间座壳属（Diaporthe phaseolorum）。（2）拮抗菌的分离、筛选、鉴定:从莲雾果园内根系土壤和热带水果叶片样品中分离筛选得到9株拮抗菌,经复筛最终确定1株拮抗效果最佳的菌株（编号为N-1）作为研究对象,经形态学和生理生化表征,并结合16S r DNA序列分析,将N-1鉴定为暹罗芽孢杆菌（Bacillus siamensis）,其初步生物学特性研究结果表明:该菌在30°C,p H中性的条件下培养27 h,生长最旺盛。（3）拮抗菌N-1与实验室前期分离得到的9株拮抗菌的广谱拮抗能力比较研究:将21株热带水果采后病原菌作为指示菌以测定10株拮抗菌的体外广谱拮抗能力,24孔板测试结果显示:7株拮抗菌LW,JM-1,TE-7,W-2,D,G和N-1均对指示病原菌具有广谱抗菌活性,经预先接种拮抗菌菌液,指示病原菌的菌丝生长得到了不同程度的抑制,经抑制能力分级,发现仅暹罗芽孢杆菌（N-1）对所有的指示病原菌的抑制能力全为“+++”,病原菌在孔中几乎不生长,其对21供试病原菌表现出最佳的广谱拮抗活性。（4）拮抗菌N-1处理芒果和荔枝果实的研究:体内自然防效实验表明,N-1能够显著降低芒果和荔枝果实在采后贮藏期的发病和腐烂,抑制荔枝果实采后褐变,经N-1处理的荔枝果实好果率得到了显著提升（p＜0.05）。与对照相比,经10~8 CFU/m L N-1菌液处理能够很好地维持芒果和荔枝果实的贮藏期生理品质,N-1处理在不同程度上延迟了芒果和荔枝果实的硬度,TSS,TA和Vc含量的下降。在贮藏末期,芒果和荔枝果实的TSS和TA含量的下降得到显著延迟,尤其是经N-1处理的荔枝果实,其Vc含量可保持在50 mg/100 g以上。（5）广谱生防菌株N-1的广谱拮抗机制初步研究:在共培养过程中,由N-1产生的挥发性有机化合物（VOCs）对测试真菌表现出显著的抑制作用。基于固相微萃取（SPME）的气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）分析结果表明,N-1可分泌15种挥发性化合物,其中5种已在报道中被证明具有抑制真菌菌丝生长和分生孢子萌发的抑菌活性,1-Undecene的相对峰面积可达81.08%;超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱（UPLC-QQQ-MS）分析结果显示,表面活性素脂肽（Surfactin）可能存在于拮抗细菌N-1的粗提物中;N-1还可以产生的有效的胞外裂解酶,包括β-1,3-葡聚糖酶,纤维素酶和蛋白酶。几种不同拮抗机制共同介导了B.siamensis在体内和体外防御、抑制病原菌的广谱性能。
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