低温等离子体对肠炎沙门氏菌和单增李斯特菌杀菌机理及在罗非鱼中应用研究

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低温等离子体作为一种新型非热杀菌技术,因能够在常温下简便操作,越来越受人们的关注。食源性致病菌具有较强的致病性,污染食品容易引起食源性疾病,造成人身伤害和重要经济损失。因此,有效控制微生物污染是食品安全生产的重要内容,尤其是不宜采用热杀菌处理的生鲜食品,研究开发非热杀菌技术对提高生鲜食品的安全性至关重要。本论文通过研究低温等离子体处理条件对肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,S.enteritidis)和单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,L.monocytogenes)的杀菌作用,探索低温等离子体对不同菌种的作用机理,通过处理时间参数的变化来研究对罗非鱼片杀菌效果及品质的影响,研究处理后罗非鱼片在冷藏期间微生物数量及菌群结构的影响,为低温等离子体在食品工业的应用提供理论参考。(1)以S.enteritidis和L.monocytogenes为研究对象,研究不同低温等离子体处理条件的杀菌效果,活性物质含量和有氧呼吸关键酶活性的关系,探索其杀菌作用机理。两种细菌的菌落数量随处理电压和处理时间的增加而减少,直到80 k V处理180s时,S.enteritidis和L.monocytogenes的数量分别减少了1.82和0.75 log CFU/m L,其对S.enteritidis的杀菌效果优于L.monocytogenes。五种有氧呼吸关键酶(Na+/K+-ATP酶、琥珀酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、丙酮酸激酶和己糖激酶)的活性在低温等离子体处理后均明显下降,其中低温等离子体处理对S.enteritidis琥珀酸脱氢酶和L.monocytogenes丙酮酸激酶的活性抑制效果最为显著,在80 k V处理180 s后下降至无法检出状态。低温等离子体杀菌活性物质(·OH、H2O2、~1O2、NOx、O3)含量随着处理电压和时间的增加而逐渐增加,S.enteritidis和L.monocytogenes的杀菌效果分别与·OH和H2O2的相关性最强。(2)以罗非鱼片为研究对象,探讨低温等离子体处理时间对罗非鱼片杀菌效果及其品质的影响。罗非鱼片表面分别接种S.enteritidis、L.monocytogenes和二者混合菌液,鱼片包装后经低温等离子体70 k V处理0、60、120、180、240和300 s。鱼片表面的菌落数量随着处理时间延长而逐渐降低,处理300 s的S.enteritidis和L.monocytogenes分别降低了2.34和1.69 log CFU/g;接种混合菌液组的S.enteritidis和L.monocytogenes分别降低了1.84和1.36 log CFU/g;随处理时间延长,鱼肉硬度下降明显,但弹性无显著变化;结合水含量无明显变化,不易流动水含量略有下降,自由水含量显著上升;鱼肉总色差随处理时间的延长而增加;TBARS值由未处理的0.13MDA eq/kg增加至处理300 s的1.83 MDA eq/kg,但仍在可接受范围内;鱼肉肌浆蛋白处理后轻微氧化,肌原纤维蛋白无明显变化。(3)以罗非鱼片为研究对象,研究低温等离子体处理不同时间(70 k V处理60、180和300 s)罗非鱼片在4℃冷藏期间主要菌群微生物多样性的变化。不同处理时间对冷藏期间鱼片上菌落总数、嗜冷菌总数、假单胞菌、肠杆菌和产硫化氢菌均有抑菌效果。高通量测序结果显示,低温等离子体处理的罗非鱼片在冷藏期间微生物多样性随冷藏时间的增加呈波动变化,冷藏0-2 d物种丰富度下降,随后在3-9 d增加至峰值。冷藏第0 d的优势菌属是不动杆菌属(Acinetobacter)、巨型球菌属(Macrococcus)、假单胞菌属(Pseudomonas)和乳球菌属(Lactococcus),冷藏中期不动杆菌属(Acinetobacter)和巨型球菌属(Macrococcus)丰度逐步下降,乳球菌属(Lactococcus)在3 d相对丰度上升随后逐渐降低,在冷藏的15 d优势菌属转变为假单胞菌属(Pseudomonas)、节杆菌属(Arthrobacter)、库特氏菌属(Kurthia)。
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