背景大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，严重威胁着人类生命健康。由于大肠癌起病隐匿，早期多无明显症状，一旦出现症状，大多已是中晚期。大肠癌患者的生存率直接与诊断时的疾病的进展程度有关。当大肠癌患者癌灶局限于肠壁时（A期或B期），五年生存率>75%，当出现淋巴结转移时，患者的五年生存率则降至30%-60%。因此，对大肠癌早期有效的筛查诊断，能够大大的提高患者的生存率，降低病死率。目前最常用的筛查方法是粪便潜血实验，但其特异性低、且易受到食物的影响。研究认为，大肠癌的发生发展是一个受多基因、多阶段、多步骤调控的复杂过程，此过程常与细胞增殖、凋亡失控有关，涉及癌基因激活、抑癌基因失活、错配修复基因以及一些修饰基因的改变。某种基因的改变只是在大肠癌发生的某一阶段以高频率出现，从而导致大肠癌的发生。其中涉及与大肠癌有关的有APC、MMR、DCC、P53抑癌基因和K-ras、C-myc原癌基因的突变。APC基因是家族性腺瘤样息肉病(familial adenomatous polyposis, FAP)的易感基因，是大肠肿瘤发生的早期分子事件，但稳定于肿瘤发生发展的全过程。近年研究表明，APC基因在85%的结肠癌中缺失或失活，并且该基因的缺失与结肠癌的遗传易感性密切相关。已有研究表明，粪便与组织中APC基因联合检测对大肠癌高危人群的筛查诊断具有较高的特异性，并且减少行内窥镜检查的痛苦。本课题运用蛋白截短检测技术（PTT），检测散发性大肠癌患者的癌组织及粪便脱落细胞APC基因的突变，探索粪便基因检测代替组织基因检测的可行性。目的利用蛋白截短检测技术（PTT）联合检测散发性大肠癌患者粪便及癌组织中APC基因的突变，探讨其在大肠癌筛查中的作用及建立无创性筛查大肠癌方法的可行性，从而探索大肠癌早期诊断既经济有效又快捷的筛查方法。方法（1）收集宁夏医科大学总医院2011年10月-2012年10月期间，50例行肠镜活检诊断为大肠癌的患者，并经手术切除病理学明确诊断为散发性大肠癌患者的粪便3-5g（术前收集），少量癌组织（大于1g）；30例经胃肠镜及其他影像学、实验、物理学检查确诊为正常人群的粪便3-5g，少量肠粘膜组织（大于1g）。以上标本均在-80℃保存，共计80例，扩增目的DNA。（2）运用蛋白截短检测技术（PTT），对50例散发性大肠癌患者的癌组织和粪便脱落细胞及30例正常人群的肠粘膜组织和粪便脱落细胞中APC基因第15外显子进行截短型突变检测，并两两进行对比，比较正常人群与大肠癌患者粪便及癌组织APC基因突变的情况。（3）对检测出有突变基因的粪便及组织进行统计学分析，探讨散发性大肠癌患者的粪便与癌组织中APC基因第15外显子突变的阳性率有无差异。结果（1）用组织提取的DNA为模板，扩增目的基因成功率100%（50/50），用粪便提取的DNA为模板，扩增目的基因成功率86%（43/50）。（2）应用荧光标记的数字化PTT技术对50例大肠癌组织标本的APC基因第15外显子进行截短型突变检测，共检出17例截短型突变（其中引物15A检出4例突变，引物15B检出7例突变，引物15C检出2例突变，引物15D检出4例突变）,突变率为34%；对50例粪便标本的APC基因第15外显子进行截短型突变检测，共检出14例截短型突变（其中引物15A检出2例突变，引物15B检出6例突变，引物15C检出2例突变，引物15D检出4例），突变率为32.6%。其中有13例癌组织及对应的粪便均阳性。（3）30例正常人群的大肠粘膜组织及粪便脱落细胞中APC基因第15外显子进行截短型突变检测均未检测出有突变。（4）散发性大肠癌患者癌组织与粪便脱落细胞APC基因第15外显子截短型突变率相比差异无统计学意义（χ2检验P>0.05）。Kappa值为0.749，大肠癌患者的癌组织中APC基因及粪便脱落细胞APC基因检测的一致性较好。结论（1）粪便中检测APC基因突变在大肠癌的早期筛查中具有可行性。（2）大肠癌患者的癌组织检测APC基因与粪便脱落细胞检测APC基因的一致性较好，为粪便替代癌组织进行APC基因检测提供了可行性的依据。（3）蛋白截短检测技术（PTT）在检测APC基因长片段肽链的缺失或插入引起的移码突变上较其他技术具有一定的优越性。