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目的:1、成功制备pLXSN-EGFP,并将其经侧脑室注射入MCAO大鼠,通过对注射剂量和时机的筛选,研究利用pLXSN-EGFP法在体示踪MCAO大鼠NSCs的可行方案。2、应用pLXSN-EGFP示踪探讨针刺任脉对MCAO大鼠NSCs增殖分化的影响方法:1、采用CaCl2法克隆pLXSN-EGFP,利用阳离子脂质体Lipo2000介导法转染包装获得高病毒滴度的pLXSN-EGFP,并经侧脑室按低、中、高剂量注射入MCAO大鼠,观察EGFP细胞数目、强度及注射后大鼠死亡数;2、将pLXSN-EGFP注射入MCAO大鼠,根据处理方式不同随机分为正常组(Norm)、假手术组(Sham)、模型组(MCAO)、任脉电针组(Acu)、任脉艾灸组(Mox),除Norm组外,每组分别随机分为7天组、14天组和28天组三个亚组。运用pLXSN-EGFP示踪、免疫荧光双标技术,利用激光共聚焦显微镜观察缺血侧侧脑室下区EGFP细胞和EGFP/Nestin双标细胞的表达、缺血海马齿状回EGFP阳性细胞和EGFP/NSE双标细胞的表达。结果:1、成功制备示踪剂pLXSN-EGFP后,经侧脑室注射后各剂量组死亡率无差别,7天6ul组为最佳注射时机和剂量组合。2、利用pLXSN-EGFP体内示踪神经干细胞,Norm组、Sham组没有观察到EGFP阳性细胞;与模型组大鼠EGFP阳性细胞数目相比,电针任脉组大鼠有明显增多趋势;艾灸组大鼠具有和电针组大鼠相同表现。电针组、艾灸组大鼠EGFP阳性细胞随时间延长均有减少趋势,但相比同时相模型组大鼠仍具有明显增多趋势。1)SVZ区Norm组、Sham组没有观察到EGFP/Nestin阳性细胞;与模型组相比,电针任脉组、艾灸任脉组大鼠有明显增多趋势;艾灸组和电针组两组大鼠EGFP/Nestin阳性细胞数目相比,在第7天、14天差别无统计学意义,在第28天艾灸组EGFP/Nestin阳性细胞数目多于电针组。电针组、艾灸组大鼠EGFP/Nestin阳性细胞随时间延长均有减少趋势,但相比模型组大鼠仍具有明显增多趋势。2)海马齿状回(DG)区Norm组、Sham组没有观察到EGFP阳性细胞;与模型组大鼠EGFP阳性细胞数目相比,电针任脉组大鼠有明显增多趋势,P<0.01;艾灸组大鼠具有和电针组大鼠相同表现。艾灸组和电针组两组大鼠EGFP阳性细胞数目相比,在第7天、14天相比差别无统计学意义,第28天艾灸组EGFP阳性细胞数目多于电针组。电针组、艾灸组大鼠EGFP阳性细胞随时间延长均有减少趋势,但相比模型组大鼠仍具有明显增多趋势。结论:1、利用侧脑室在体注射pLXSN-EGFP活体示踪可标记神经干细胞。2、针刺任脉能明显促进MCAO大鼠神经干细胞增殖与分化。