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背景和目的:神经血管单元(NVU)由神经元-胶质细胞-血管构成。脑缺血激活免疫系统,包括淋巴细胞在内的免疫细胞迁移至缺血区,促进了神经炎症并加速NVU的损伤。因此,通过免疫调节改善神经血管单元的功能,对缺血性脑损伤的治疗具有重要意义。本研究探索了两种免疫调节手段对神经炎症和脑缺血的影响。调控鞘氨醇-1-磷酸受体(S1PR)在缺血性卒中的临床前和临床表现出了神经保护作用,但其潜在的机制仍然知之甚少。为了验证S1PR调节由促进神经血管单元功能的作用,我们研究了选择性调节S1PR1对脑皮层小动脉血栓形成和血流动力学的影响。旨在进一步探索S1PR1调节在神经血管炎症中的作用。转位蛋白18k Da(TSPO)主要定位于线粒体外膜,在炎症条件下,主要在中枢神经系统内的小胶质细胞中表达。本研究还进一步探索了激活TSPO对神经炎症和缺血性脑损伤的影响。研究方法:(1)在双光子激光扫描显微镜下活体观测小鼠皮质小动脉的流速,建立激光诱导的小鼠脑皮层小动脉血栓形成模型,在激光诱导的血栓形成后30分钟,用RP101075(0.6 mg/kg)或载体溶液处理小鼠。使用双光子显微镜观察血栓形成后血液流速,测量血栓体积变化。使用小动物心电图、小动物无创血压计监测RP101075对小鼠心率血压的影响。使用免疫荧光染色探究小鼠血栓成成后RP101075对血栓组成成分的影响。(2)诱导60分钟大脑中动脉阻塞再灌注脑缺血小鼠模型成功后,利用流式细胞术和病理染色检测脑内TSPO表达,诱导小鼠60分钟大脑中动脉模型阻塞模型后,分不同时间点腹腔注射50 mg/kg/天的Etifoxine,通过评估神经功能评分、测量脑梗死体积评价药物疗效;诱导30分钟、90分钟大脑中动脉阻塞再灌注脑缺血模型,手术结束后腹腔注射50mg/kg/天的Etifoxine,对照组小鼠给与同等剂量的载体溶液,分别观察两组小鼠的脑梗死体积和神经功能损伤来探究药物作用。使用流式细胞术,免疫荧光染色来检测药物对小鼠缺血性卒中后脑内免疫炎症的影响;最后,使用小分子抑制剂PLX3397对脑内小胶质细胞进行特异性删除,并再次使用药物干预脑梗死预后,从而评价小胶质细胞在药物作用中所扮演的角色。结果:(1)RP101075在生理条件下没有改变皮质小动脉的流速。激光诱导的血栓形成导致皮质小动脉中流速显着降低(~80%),持续至少90分钟。在RP101075处理后,血栓形成所导致的皮质小动脉降低的流速得到显著提升。RP101075没有显着影响凝血时间,出血时间,心率和血压。此外,RP101075治疗可减少血栓体积,同时降低血栓中的白细胞含量。我们的研究结果表明,选择性S1PR1调节剂RP101075改善了血栓形成后的微血管循环,这意味着促进神经血管功能是S1PR调节神经保护作用的一部分。(2)脑组织内,特别是小胶质细胞中TSPO表达量在脑梗死后明显上调,作为TSPO的外源性配体Etifoxine既可以明显减少脑缺血后小质细胞的激活,又同时降低了由小胶质细胞释放的多种促炎性因子如TGF-β,TNF-a,IL-6,i NOS,IL-1β,从而减轻了小鼠脑梗死后神经功能缺损以及脑梗死体积。而这一作用在使用小分子抑制剂对脑内小胶质细胞进行系统删除后,便不复存在,这也就意味着,TSPO的神经保护作用需要小胶质细胞的参与来实现。结论:选择性S1PR1调节可以改善血栓形成后的微血管循环。激活TSPO可以减轻神经炎症和缺血性脑损伤。