随着我国交通及体育等事业的不断发展,创伤、感染、肿瘤等引起的骨缺损病例逐年增加,临床上对骨损伤治疗的要求日益迫切。骨损伤治疗的药物主要解决损伤修复及预防术后感染这两大问题,目前临床用药虽然疗效良好,但受药理作用单一等因素的影响,需多种药物联合应用同时,也增加不良反应等用药风险。若一种药物既能修复骨损伤,又能预防术后感染,这将为临床治疗骨损伤提供新的思路。现代药理研究表明,中药马钱子提取物具有镇痛抗炎、抗菌、抗肿瘤及促进软骨细胞增殖等作用。马钱子碱作为马钱子的主要有效成分,是否进一步抗临床耐药菌及能否促进成骨细胞增殖?目前尚未深入研究。故本文旨在探索马钱子碱的硫酸盐硫酸马钱子碱(brucine sulfate,BS)的体外抑菌活性及对成骨细胞增殖的影响。研究内容主要包括以下两个方面:第一部分,首先通过回流、酸提、萃取、纯化及结晶等步骤制备BS,用高效液相色谱法(HPLC)对BS进行定性及定量分析。其次,采用牛津杯法初步考察BS对大肠杆菌(E.coli)和金黄色葡萄球菌(S.aureus)抑制作用,比浊法研究BS对E.coli和S.aureus(标准株及耐药株)的抑菌浓度曲线及时间曲线,同时采用扫描电镜(SEM)观察经BS处理后的细菌微观形貌并对其抑菌机制进行初步探讨。现得出以下结论:(1)BS为黄白色结晶,HPLC分析发现,所制备的BS纯度为95.3%。(2)BS对E.coli和S.aureus(标准株及耐药株)的生长均具有抑制作用,且对E.coli耐药株的抑制效果最佳,单次给药后的抑菌活性长达3天。(3)经BS处理后的E.coli及S.aureus细菌表面形态发生改变,出现皱缩、融合等现象,其抑菌机制可能与破坏细菌细胞壁有关。第二部分,首先采用细胞计数法(CCK8)确定BS对hFOB1.19人成骨细胞的半数抑制浓度(IC50)和细胞增殖效果,随后借助细胞免疫荧光(IF),蛋白免疫印迹(WB)及实时荧光定量PCR(q PCR)实验在蛋白及基因水平对BS促进成骨细胞增殖的机制进行探讨。现得出以下结论:(1)BS对hFOB1.19成骨细胞的IC50浓度为0.23 mg/m L,当浓度在0.08μg/m L～1μg/m L时,对成骨细胞有促进增殖作用。(2)BS能使总蛋白中Runx2、Cyclin D1及β-catenin表达上调,能明显促进β-catenin蛋白转位入核。其次,BS可上调成骨细胞中β-catenin,Runx2和Cyclin D1的m RNA表达,下调GSK-3β的m RNA表达水平。这些结果说明BS可通过影响Wnt/β-catenin信号通路来促进hFOB1.19成骨细胞的增殖。