土壤拮抗放线菌的筛选及活性产物的初步研究

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本研究对采自陕北不同地区的土壤样品进行了放线菌的分离、纯化,得到174株放线菌。用经典分类方法对其进行初步分类鉴定,结果表明:它们分属于8个属,即:链霉菌属、诺卡氏菌属、小单孢菌属、放线菌属、游动放线菌属、分枝杆菌属、嗜皮菌属、链孢囊菌属。其中链霉菌属分布最广,种类最多,其次是诺卡氏菌属和小单孢菌属。 用发酵液扩散法从分离到的放线菌中筛选出10株有拮抗作用的放线菌,其中NW136菌株对病原菌的抑菌作用最强、且防治范围广。其发酵液对小麦根腐、番茄灰霉、小麦赤霉、烟草赤星及玉米大斑病菌的抑制中浓度(EC50)分别为1.81mlJL、12.93mL/L、8.16mL/2L、3.96mL/L、3.92mL/L。对NW136菌株的拮抗机制研究表明:该菌既有竞争作用,又产生对植物病原菌有抑制作用的胞外抗生物质。 为了提高活性物质产量,对NW136菌株的培养基进行了筛选和优化,并对其发酵工艺条件进行了初探。得到培养基最佳配方为:黄豆饼粉2.0%,葡萄糖1.5%,淀粉1.5%,K2HPO4 0.05%,CaCO3 0.5%。最佳发酵工艺条件为:发酵培养基初始pH 7.5,培养温度28℃,接种量8%,摇床转速210r/min,250mL三角瓶的装液量为50mL,发酵时间108h。 对NW136菌株及其所产活性物质的稳定性研究表明:NW136在连续7次转管过程中,产生活性物质的性能表现稳定。所产活性物质可耐受较高温度(100℃),对酸稳定;而在长时间紫外光照射和碱性条件下稳定性差。 盆栽实验结果表明,NW136菌株发酵液对番茄灰霉病具有一定的防效,保护作用优于治疗作用,在200mL/L浓度时,防效均在70%以上。大棚防治实验结果表明,其发酵液对番茄叶片及果实灰霉病均有较好的防效,浓度为300mL/L时,防效分别为69.82%和72.74%。 应用经典分类鉴定方法对NW136放线菌菌株进行了鉴定,初步认为该菌与链霉菌属白孢类群的微白链霉菌(Streptomyces albidus)类似。
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