芥菜提取物对西瓜枯萎病菌抑菌活性的研究

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我国是西瓜生产与消费大国,西瓜生产在农业结构调整和农民增收中起着重要的作用,而西瓜枯萎病的发生给西瓜生产带来巨大的经济损失和资源浪费。在绿色消费盛行的今天,安全、环保、价格低廉的植物源抑菌剂符合国家及社会的需求。因此,从天然植物尤其是可食性植物中寻找和筛选具有抑菌效果,对人体健康和生态环境无害的抑菌活性物质具有十分重要的现实意义。本试验旨在研制和开发适合西瓜枯萎病的植物源杀菌剂代替化学杀菌剂,研究结果如下:1.采用菌丝生长速率法,测定芥菜提取物对西瓜枯萎病菌、水稻纹枯病菌、葡萄座腔菌和烟草黑胫菌等植物病原菌菌丝生长的抑制作用。结果表明,采用不同有机溶剂获得的芥菜提取物对西瓜枯萎病菌均有一定的抑制作用,以95%乙醇提取的抑菌效果最好,提取物的抑菌率可达90%以上。最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为0.5 g/mL和1.0 g/mL,经毒力测定其EC50为0.2212 g/mL。通过试验对其他10种植物病原菌的抑菌活性表明:芥菜乙醇提取物对水稻纹枯菌、葡萄座腔菌、烟草黑胫菌、辣椒菌核病菌等4种病原菌抑菌效果较强,其EC50分别为0.0898 g/mL、0.1265 g/mL、0.1679 g/mL、0.1685 g/mL,对葡萄炭疽病菌的抑制效果最弱,EC50为0.5833 g/mL。2.采用单因素试验和响应面Box-Benhnken试验设计方法,研究了乙醇浓度、温度、料液比和时间等工艺参数对提取芥菜抑菌物质的影响。结果表明:各因素对芥菜抑菌物质提取率影响的大小顺序为:乙醇浓度>温度>时间>料液比。响应面最佳优化工艺为:乙醇浓度82.46%、时间2.02 h、液料比15.04 mL/g、温度49.79℃,模型预测值为98.37%,实际平均值为97.56%,实际值与预测值的相对误差仅为0.82%。3.设置0、1/2MIC、MIC和2MIC 4种处理浓度,通过测定菌丝形态结构、菌液电导率、菌体丙二醛含量、细胞壁相关水解酶活性、呼吸代谢途径酶活性、可溶性蛋白含量及还原糖含量等指标的变化。结果表明,经芥菜提取物处理菌液后电导率明显增大,其中浓度为2MIC时的菌液电导率最大可达1.45 ms/cm。当处理浓度为2MIC时菌体丙二醛含量最高,几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶活性也升高,分别为10.57 U/(g·FW)和14.16 U/(g·FW),细胞壁降解,使细胞完整性受损;此时,琥珀酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶活性降低,后者酶活从0.53 U/mg下降至0.28 U/mg;可溶性蛋白、还原糖含量等菌体细胞内含物显著降低,呼吸能量代谢受阻,抑制菌体生长。4.采用UHPLC-Q-TOF/MS技术对儿菜、芥菜笋、甜芥菜、榨菜和竹芥菜等5个芥菜品种提取物的化学成分进行定性定量分析。结果表明从5个芥菜品种中鉴定出63种主要化合物,包括有机酸类27种、醇类4种、硫苷类5种、黄酮类5种、氨基酸类12种、糖类3种和其它7种。硫苷类化合物相对含量最高,其中3–丁烯基硫苷在5个品种中的含量均较高,分别为儿菜(9.53%)、芥菜笋(3.95%)、甜芥菜(6.08%)、榨菜(10.98%)和竹芥菜(14.32%);有机酸类化合物种类最多,5个芥菜品种以L-苹果酸的含量较高,介于0.48%0.78%,芥子酸含量儿菜(0.50%)明显高于榨菜(0.04%);在氨基酸类化合物中,儿菜和榨菜中含量较高的为丙甘氨酸,分别是1.72%和1.29%,而芥菜笋、甜芥菜和竹芥菜含量较高的为L-脯氨酸,分别是0.93%、0.67%和0.56%。
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