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研究背景神经胶质细胞瘤是起源于大脑和脊髓胶质细胞的恶性肿瘤,占中枢神经系统肿瘤的40%左右,占颅内恶性肿瘤的80%。mi R-128-3P在多种组织中表达,参与脂肪的合成与降解,调节肿瘤干细胞和上皮细胞间充质转化(EMT),促进增殖、侵袭和转移的作用,还参与心肌细胞的缺血再灌注损伤和DNA损伤应答反应,与肿瘤细胞的化疗敏感性相关。神经元穿透素-1具有调节肿瘤细胞生长、增殖、转移的作用。IRS-1/PI3K/AKT是人类恶性肿瘤中功能紊乱最多的信号通路之一,在多种肿瘤细胞中发挥代谢、迁移、生长、增殖、存活、自噬和基因组稳定性的调节等多种细胞生物功能。研究目的(1)探索NPTX1、mi R-128-3P在神经胶质细胞瘤组织和细胞的表达及其临床特征相关性,说明mi R-128-3P和NPTX1与神经胶质细胞瘤发病相关;(2)探索NPTX1对神经胶质细胞瘤增殖的影响,为证明NPTX1在神经胶质细胞瘤中发挥致癌基因的作用提供证据;(3)探讨NPTX1促进神经胶质细胞瘤增殖的机制,为靶向NPTX1治疗神经胶质细胞瘤提供理论依据。(4)证实NPTX1为mi R-128-3P的靶基因;(5)阐明mi R-128-3P在神经胶质细胞瘤中的作用及其作用机制。研究方法1.NPTX1通过IRS-1/PI3K/AKT信号通路促进神经胶质细胞瘤的增殖RT-PCR和Western blot分析神经胶质细胞瘤癌组织和癌旁组织、正常神经胶质细胞株HEB和神经胶质细胞瘤细胞株U87、U373和SHG44中NPTX1的蛋白和m RNA表达水平。生存分析高表达NPTX1的神经胶质细胞瘤患者和低表达NPTX1的神经胶质细胞瘤患者预后的差异。MTT检测细胞增殖能力。脂质体转染法转染NPTX1的si RNA。Western blot技术分析IRS-1/PI3K/AKT的活化状态。2.mi R-128-3P靶向NPTX1抑制神经胶质细胞瘤细胞的增殖RT-PCR试剂盒对神经胶质细胞瘤癌组织和相应癌旁组织标本中的mi R-128-3p的表达水平和NPTX1的m RNA含量。采用mi RNA靶基因预测软件(Target Scan Human http://www.targetscan.org/)预测mi R-128-3P与NPTX1的靶向调控关系,荧光素酶报告系统分析mi R-128-3P与NPTX1的靶向调控关系。通过Western Blot技术分析NPTX1的表达水平、IRS-1/PI3K/AKT的活化状态,通过MTT细胞增殖试剂盒细胞增殖。研究结果一、NPTX1通过IRS-1/PI3K/AKT信号通路促进神经胶质细胞瘤的增殖1.NPTX1在神经胶质细胞瘤组织和细胞的表达及其临床特征相关性2.NPTX1的过表达促进神经胶质细胞瘤细胞的增殖能力3.NPTX1影响神经胶质细胞瘤细胞中IRS-1/PI3K/AKT信号通路的活化状态4.IRS-1/PI3K/AKT信号通路在神经胶质细胞瘤组织中被活化二、mi R-128-3P靶向NPTX1抑制神经胶质细胞瘤细胞的增殖1.mi R-128-3P在神经胶质细胞瘤组织中的表达及其与NPTX1表达水平的相关性2.mi R-128-3P抑制神经胶质细胞瘤细胞的增殖3.mi R-128-3P在神经胶质细胞瘤细胞中靶向调控NPTX1表达4.mi R-128-3P抑制IRS-1/PI3K/AKT信号通路5.NPTX1的基因沉默抑制IRS-1/PI3K/AKT信号通路的激活,但并不影响mi R-128-3P的表达研究结论1.NPTX1在神经胶质细胞瘤中高表达,mi R-128-3P在神经胶质细胞瘤中低表达,NPTX1属于致癌基因,其表达水平与神经胶质细胞瘤的预后负相关,mi R-128-3P属于抑癌基因,其表达水平与神经胶质细胞瘤的预后正相关。2.NPTX1是mi R-128-3P的靶基因,mi R-128-3P靶向转录调控神经胶质细胞瘤细胞中的NPTX1的表达。3.NPTX1通过IRS-1/PI3K/AKT信号通路促进神经胶质细胞瘤的增殖。4.mi R-128-3P通过靶向调控NPTX1的表达,影响IRS-1/PI3K/AKT通路抑制神经胶质细胞瘤的增殖。