目的：建立一种检测恶性疟原虫和间日疟原虫的SYBR Green实时PCR法,并将建立的方法进行初步临床应用。方法：1.针对恶性疟原虫与间日疟原虫18S rRNA基因设计2对(3条)外引物和2对(3条)内引物,建立可同时扩增出恶性疟原虫和间日疟原虫特异性片段的多重巢式PCR方法,并进行敏感性、特异性评价和临床标本检测。2.利用上述巢式引物进行SYBR Green实时PCR反应,同时进行熔解曲线和Tm值分析。优化实时PCR的反应体系与反应条件,检测该方法的敏感性、特异性和重复性并进行临床标本检测。结果：1.多重巢式PCR可同时扩增出恶性疟原虫和间日疟原虫的18S rRNA基因片段长度分别为162bp(恶性疟原虫),112bp(间日疟原虫),并能检出混合感染,该实验检测间日疟原虫的灵敏度为101copies/μl。特异性实验结果显示每对引物只检测对应的虫种,54份临床标本的检测结果与镜检法无差别(P>0.05),敏感度为97.30%,特异度为5.88%。2. SYBR Green实时PCR构建的荧光定量标准曲线循环阈值与模板浓度呈现良好的线性关系,扩增效率为101.884%,检测灵敏度为101copies/μl,从提取DNA到完成检测只需3小时,重复性好。该方法与三日疟原虫及卵形疟原虫无交叉反应,对临床标本的检测结果与多重巢式PCR检测结果一致。结论：1.本研究建立的多重巢式PCR方法可同时检测恶性疟原虫与间日疟原虫,敏感性高,特异性强,可用于基层部门对疟疾的检测与恶性疟原虫和间日疟原虫的鉴别。2.本研究建立的SYBR Green实时PCR方法具有污染风险低、灵敏度高、不需荧光标记探针、成本低及高通量等优点,适用于疟疾的检测与恶性疟原虫和间日疟原虫的鉴别。图11幅,表7个,参考文献53篇。