带状疱疹(HZ)是由水痘-带状病毒(VZV)引起的好发于春秋季节的急性、炎症性、病毒性皮肤疱疹性病变,疱疹沿感觉神经节分布,多伴有神经痛。带状疱疹不仅具有自限性,而且带状疱疹病毒能够产生后遗神经痛(PHN),从而对患者产生比较严重的影响,最终导致患者的生活质量显著下降。随着中国逐步步入老年社会,带状疱疹发病人群逐年增加,相关报道显示:约50%的带状疱疹发生在60岁以上,而85岁以上的人群中,约一半以上的人可能会发生带状疱疹。通过注射带状疱疹减毒活疫苗,可有效降低带状疱疹的发病概率,还可以减轻发作以后PHN的发生率,缓解带状疱疹的发病症状,减轻老年人发病痛苦提高生活质量。由于带状疱疹存在治愈过程漫长,费用昂贵的问题,而且预防带状疱疹能够减轻患者痛苦,降低家庭经济负担,因此国家推进带状疱疹疫苗具有重大的社会意义。目前,国外有默沙东与GSK两家制药公司生产带状疱疹疫苗,用于预防带状疱疹和带状疱疹后遗神经痛。由于减毒活疫苗形式的带状疱疹疫苗要求单剂量病毒含量处于较高水平才能刺激抗体的产生,所以要求带状疱疹生产工艺必须具有高产的特性,虽然国内已有多家企业获得带状疱疹疫苗临床批件,但是国内市场暂无该疫苗上市。现在国内外企业的带状疱疹疫苗工艺研究多受限于产量低且不能用于大规模制备,因此进行带状疱疹疫苗制备工艺的研究非常必要。带状疱疹疫苗的工艺流程包括:细胞复苏、细胞传代培养、病毒培养、洗涤换液、单次收获物制备、原液制备、半成品制备、成品制备等,工艺的每个工序参数繁多。目前,以细胞工厂为带状疱疹疫苗制备的工艺尚未见报道,本论文通过对细胞培养环节影响因素(细胞传代比例)、病毒培养环节影响因素(培养温度、培养基种类、血清浓度、碳酸氢钠浓度、谷氨酰胺浓度、感染复数(MOI)、病毒接种方式、病毒收获环节影响因素(洗涤条件、离心速度、离心时长、保存时间)等方面进行对比研究。通过对细胞形态、计数细胞、检测病毒滴度、检测卡那霉素残留量及牛血清白蛋白残留量多项指标进行对比分析,最终确定了带状疱疹疫苗的制备工艺。结果显示,不同的细胞传代比例对细胞密度和形态均有影响,转瓶传代至细胞工厂时,细胞传代比例1:2时细胞密度较高,形态较好;采用培养温度在35℃、培养基为日水MEM、血清浓度为2%、碳酸氢钠浓度为5%、谷氨酰胺浓度为1%、感染复数(MOI)在0.01~0.1区间、采用混合接种方式接种病毒,所制备的病毒滴度较高;采用400ml/层洗涤液所制备的单次收获物卡那霉素残留量和牛血清白蛋白残留量较低;采用1500rpm转速离心15min单次收获物滴度高;单次收获物于-60℃以下超低温冰箱保存12个月,滴度稳定。采用优化工艺参数用于带状疱疹疫苗的制备,产量提升3.3倍,且抗生素和牛血清白蛋白含量降低,质量更加安全。