【摘 要】
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十字花科包括白菜类、甘蓝类、芥菜类、萝卜类等重要的蔬菜作物。病毒病是危害十字花科蔬菜的主要病害之一。目前,人们主要通过常规育种,从优质的种质资源中导入抗性基因/簇,提高
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十字花科包括白菜类、甘蓝类、芥菜类、萝卜类等重要的蔬菜作物。病毒病是危害十字花科蔬菜的主要病害之一。目前,人们主要通过常规育种,从优质的种质资源中导入抗性基因/簇,提高作物对病毒病的抗性。但传统育种由于育种周期长、抗性基因常与不良性状连锁、优良种质资源的匮乏,以及物种间生殖隔离等因素的限制,阻碍了育种进程的快速发展。因此,利用基因工程创造新的抗病毒种质资源为当今抗性育种的一条重要补充途径。本研究主要利用RNA干涉的原理,试图通过基因工程的手段得到能抗芜菁花叶病毒(TuMV)的菜心资源,以及同时抗芜菁花叶病毒和黄瓜花叶病毒(CMV)的甘蓝种质资源。利用芜菁花叶病毒CP基因构建成反向重复表达载体,再利用农杆菌介导法将其导入四九菜心,共获得13个PCR阳性转化株,遗传转化效率为2.2%。为了得到对芜菁花叶病毒和黄瓜花叶病毒双抗的甘蓝资源,首先进行了甘蓝再生体系的优化。对甘蓝下胚轴外植体的高效再生体系的优化结果表明,当选取5d苗龄的下胚轴,将其置于MS+6-BA1.0 mg/L+NAA 0.1mg/L的芽分化培养基中,并于培养基中附加AgNO3 5.0mg/L时,可达到最佳的再生率。将含有TuMV的CP基因和CMV的2b基因组成的嵌合基因反向重复表达载体,利用农杆菌介导法将其导入甘蓝,PCR检测共获得10个阳性转化株,遗传转化效率为10.4%。进一步的病毒抗性检测正在进行之中,有望能获得双抗的优良甘蓝自交系材料,从而加速甘蓝的抗病毒育种进程。
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